注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

SOD(EC 1.15.1.1)是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O₂^-)，O₂^-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O₂^-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

产品内容：

提取液：液体100ml×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体5ml×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体100μL×1支，4℃保存；使用前先离心再吹打混匀。

试剂三：液体4ml×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1支，4℃保存。(由于试剂量极少，容易产生误差，现规格为0.0003g/支，使用时称取0.00003g即可。)

试剂五：液体2ml×1瓶，4℃保存；临用前将试剂四加入试剂五中，并震荡溶解。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品的前处理：

(1)细菌、细胞或组织样品的制备：细胞、细菌样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液，超声波破碎(功率20%或200w，超声3s，间隔10s，重复30次)。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。组织样本：称取约0.1g组织，加入1ml提取液进行冰浴匀浆； 8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

(2)血清(浆)样品：直接检测。

二、测定步骤：

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。

2、测定前将试剂一、三和五37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min以上。

3、样本测定(按顺序加入下列试剂)

充分混匀，37℃水浴30min后，560nm处测定各管吸光值A。计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA空白=A空1-A空2。如底部有沉淀，混匀后再行测定。

注意：

1、样本和试剂二使用时在冰上放置。

2、样本较多时，可按表格配置工作液(包含试剂一、二、三)，试剂五必须最后加入。

3、空白管1和空白管2各只需做1～2管；每个样本有一个对照管。

4、反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。

三、SOD活性计算：

1、抑制百分率的计算

抑制百分率＝(ΔA空白-ΔA测定)÷ΔA空白× 100%

尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内，越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。

2、SOD酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位。

3、SOD酶活性计算：

(1)血清(浆)SOD活性(U/ml)=[抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×V反总]÷V样×F=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F

(2)组织、细菌或培养细胞SOD活力计算：

A：按样本蛋白浓度计算

SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(V样×Cpr)×F=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)÷Cpr×F

B：按样本鲜重计算

SOD活性 (U/g鲜重)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反总]÷(W×V样÷V样总)×F=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)÷W×F

C：按细菌或细胞个数计算

SOD =活力 (U/10⁴ cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(500×V样÷V样总)×F=0.022×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F

V反总：反应体系总体积，0.2ml；V样：加入反应体系中样本的体积，0.018ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万，F：样本稀释倍数。