超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO₂^-，NO₂^-与对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

1.试剂二临用前临用前加6ml蒸馏水充分溶解。

需自备的仪器和用品：

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

操作步骤：

一、样品处理

1.组织：按照质量(g)：提取液体积(ml)为1：5～10的比例(建议称取约0.1g，加入1ml提取液)加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

2.细胞：按照细胞数量(104个)：提取液体积(ml)为500～1000：1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

3.培养液或其它液体：直接检测。

4.粉剂药物可配制成相同浓度，比如1mg/ml。

二、测定操作

注意：空白管只需测定一次。

三、计算公式

超氧阴离子清除率I%=(A对照管-A测定管)/ A对照管×100%

注意事项：

1.试剂一4℃可保存2个月，配制好的试剂二4℃可保存一周，建议实验前配制，并尽快使用。

2.样品处理完后立即进行测定，或者低温保存不超过24小时。