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淀粉分支酶(SBE)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
包装:50管/24样


产品介绍

SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是参与支链淀粉合成的关键酶,测定SBE活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。

淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收,SBE可切断支链淀粉侧支,从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值,一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

试剂名称规格保存条件
提取液液体25ml×1瓶4℃
试剂一液体20ml×1瓶4℃
试剂二粉剂×2支4℃
试剂三液体25ml×1瓶4℃
标准品液体5ml×1瓶4℃

溶液的配制:

试剂二:临用前加入1ml蒸馏水,缓慢加热,逐渐升温至沸腾,使其充分溶解,备用。

技术指标:最低检出限:0.0074mg/ml线性范围:0.008-0.7mg/ml

注意:

实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取约0.1g组织加入1ml提取液,冰浴中匀浆。15000g,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1.可见分光光度计预热30min以上,调节波长至660nm,蒸馏水调零。

2.样本测定:

试剂名称(μL)对照管测定管
煮沸1min后灭活的样本250
样本
250
试剂一320320
试剂二3030
混匀,37℃准确保温20min,置沸水浴中1min终止反应(盖紧防止水分散失),冷却
试剂三500500
试剂四100100

混匀,室温静置10min,用蒸馏水调零,660nm处读取各管吸光值。

注意:若有样本浑浊,建议离心后取上清测定。

三、SBE活力单位计算

1.按照蛋白浓度计算单位的定义:

以波长660nm的吸光度下降百分率表示,每mg蛋白在1ml反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE活性(U/mg prot) =(A对照管-A测定管)÷A对照管×100%÷1%÷(Cpr×V样本)×V反应÷T =24×(A对照管-A测定管)÷A对照管÷Cpr

2.按照样本质量计算单位的定义:

以波长660nm的吸光度下降百分率表示,每g组织在1ml反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE活性(U/g质量) =(A对照管-A测定管)÷A对照管×100%÷1%÷(W÷V提取×V样本)×V反应÷T =(A对照管-A测定管)÷A对照管÷W×24

V样本:加入样本体积,0.25ml;V提取:加入提取液体积,1ml;Cpr:蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g;V反应:反应体系体积,1.2ml;T:反应时间,20min。

注意事项:

1.可以在不同对照管中加入不同的样本,然后集中进行1min沸水浴处理。

2.试剂一如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。

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