产品说明

一般描述

用于测定血浆、血清、红细胞裂解液、组织匀浆和细胞裂解液中过氧化氢酶(CAT)活性的灵敏分光光度法(540 nm)。测定范围：0.25-4 nmol/min/ml。包含足以进行 96 次测试的试剂。

包装

1 kit in Glass bottle

组分

检测缓冲液、样品缓冲液、甲醛标准液、过氧化氢酶、氢氧化钾、甲醇、过氧化氢、紫红色(显色剂)、高碘酸钾、96 孔板、板盖

警告

毒性：多个毒性值，请参阅 MSDS(O)

制备说明

• 1X 检测缓冲液：用 18 ml HPLC 级水稀释 2 ml 10X 检测缓冲液浓缩液。该最终 1X 检测缓冲液(100 mM 磷酸钾，pH 7.0)应用于分析中。当在 4°C 下储存时，这种稀释的 1X 检测缓冲液可稳定保存至少两个月。•1X 样品缓冲液：用 45 ml HPLC 级水稀释 5 ml 10X 样品缓冲液浓缩液。将最终 1X 样品缓冲液(25 mM 磷酸钾，pH 7.5，含 1 mM EDTA 和 0.1％ BSA)应用于稀释甲醛标准品、过氧化氢酶(对照)和样品，然后进行分析。当在 4°C 下储存时，这种稀释的 1X 样品缓冲液可稳定保存至少两个月。•甲醛标准品：该小瓶包含 4.25 M 甲醛。提供的试剂为即用型。•过氧化氢酶(对照)：该小瓶包含牛肝过氧化氢酶(CAT)的冻干粉，并用作阳性对照。通过向小瓶中加入 2 ml 1X 样品缓冲液并充分涡旋来重悬 CAT。取 100 µl 重组酶，并用 1.9 ml 1X 样品缓冲液稀释。稀释酶每孔 20 µl 的等分试样在减去背景吸光度后的吸光度约为 0.29。稀释的酶可稳定保存 30 分钟。重悬的 CAT 在 -20°C 下可稳定保存一个月。•氢氧化钾：小瓶包含氢氧化钾(KOH)沉淀。将小瓶放在冰上，添加 4 ml HPLC 级冷水，涡旋震荡，得到 10 M 溶液。[警告：当氢氧化钾颗粒溶解在水中时会产生热量。如果在 4°C 下保存，该 KOH 溶液至少可以稳定保存三个月。]•过氧化氢：该小瓶包含 8.82 M 过氧化氢溶液。用 9.96 ml HPLC 级水稀释 40 µl 过氧化氢。稀的过氧化氢溶液可稳定保存 2 小时。•Purpald(显色剂)：该小瓶包含 4-氨基-3-肼基-5-巯基-1,2,4-三唑(Purpald)(溶于 0.5 M 盐酸中) 。提供的试剂为即用型。•高碘酸钾：该小瓶包含高碘酸钾(溶于 0.5 M 氢氧化钾溶液)。提供的试剂为即用型。
注意：过热会使过氧化氢酶失活。在样品制备和测定过程中，酶应保持低温。通常，过氧化氢酶在高稀释度下非常不稳定。建议以浓缩液储存样品，在进行检测的 30 分钟内稀释样品。A.组织匀浆1.解剖前，用 pH 7.4 的磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液灌注组织或冲洗组织，以去除任何红细胞和凝块。2.在冰上，将每克组织置于 5-10 ml 冷的缓冲液(即 50 mM 磷酸钾，pH 7.0，含 1 mM EDTA)中进行匀浆。3.在 4°C 下离心，10,000 x g，离心 15 分钟。4.取出上清液进行测定，并保存在冰上。如果不是同一天进行测定，则将样品在 -80°C 下冷冻。该样品可稳定保存至少一个月。B.细胞裂解液1.离心收集细胞(即在 4°C 下，1000-2000 x g，离心 10 分钟)。对于贴壁细胞，请勿使用蛋白水解酶进行收获；最好使用橡皮刮子2。在 1-2 ml 冷的缓冲液(即 50 mM 磷酸钾，pH 7.0，含 1 mM EDTA)中在冰上匀浆或超声处理细胞沉淀。3.在 4°C 下离心，10,000 x g，离心 15 分钟。4.取出上清液进行测定，并保存在冰上。如果不是同一天进行测定，则将样品在 -80°C 下冷冻。该样品可稳定保存至少一个月。C.血浆和红细胞裂解液1。使用抗凝剂(例如肝素、柠檬酸盐或 EDTA)收集血液。2.在 4°C 下，700-1000 x g，离心血液 10 分钟。在不干扰白色白细胞层的情况下，移去黄色血浆顶层。将血浆保存在冰上直至测定或在 -80°C 下冷冻。该血浆样品可稳定保存至少一个月。3.去除白色淡黄层(白细胞)并丢弃。4.用 4 倍的填充体积的冰冷的 HPLC 级水裂解红细胞(红细胞)。5.在 4°C 下，10,000 x g，离心 15 分钟。6.收集上清液(红细胞裂解液)进行分析并保存在冰上。如果同一天不测定，则在 -80°C 下冷冻。该样品可稳定保存至少一个月。D.血清1.不使用抗凝剂(例如肝素、柠檬酸盐或 EDTA)收集血液。在 25°C 下让血液凝结 30 分钟。2.在 4°C 下，2000 x g，离心血液 15 分钟。在不干扰白色淡黄层的情况下，移去黄色的血清顶层。。将血清保存在冰上。如果同一天不测定，则在 -80°C 下冷冻。该样品可稳定保存至少一个月。

储存及稳定性

自收到之日起，将试剂盒的所有组件储存于 4°C。

分析说明

计算结果a.计算每种标准品和样品的平均吸光度。b.从标准品 A 本身和所有其他标准品和样品中减去标准品 A 的平均吸光度。c.绘制标准品校正后的吸光度(来自上述步骤 2)随表1中甲醛的最终浓度(M)的变化曲线。典型的标准曲线请参见图 1(下图)。<div class="Bio_doc_image">
图2：典型甲醛标准曲线。
</div>d. 将每个样品校正后的吸光值代入标准曲线的线性回归方程，计算出样品中的甲醛浓度。<div class="Bio_doc_image">
图3：甲醛浓度等式</div>
e. 使用以下等式计算样品的过氧化氢酶活性。一个单位定义为在 25℃ 下每分钟将导致形成 1.0 nmol 甲醛的酶量。<div class="Bio_doc_image">图 4：活性等式</div>

其他说明

Wheeler, C.R., et al. 1990.Anal.Biochem.184, 193;
Johansson, L.H., et al. 1988.Anal.Biochem.174, 331.
由于该运输中有害物质的性质，您的订单可能需要支付额外的运输费用。某些尺寸的产品可免除其他有害材料的运输费用。请与您当地的销售办事处联系，以获取有关这些费用的更多信息。

法律信息

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

产品性质

安全信息