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白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)
![]() 产品介绍
总蛋白(Total Protein,TP)由白蛋白和球蛋白组成,检测白蛋白的方法有双缩脲法、色氨酸法、染料结合法,其中检测白蛋白的染料结合法可采用溴甲酚绿或溴甲酚紫染料结合,上述染料对白蛋白具有高度的亲和力,通常监测染料与白蛋白结合的初速率,该速率与样品中白蛋白浓度成正比。 白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)检测原理是在酸性环境下,白蛋白分子带正电荷,与带负电荷的溴甲酚紫(Bromocresol purple,BCP)结合生成绿色复合物,在603nm处有吸收波,该复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比,与同样处理的白蛋白标准比较,求得待测样品中白蛋白浓度,可用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的蛋白含量测定,该法操作简单、方法特异,既可手工操作,又可采用自动分析仪检测,对血清清蛋白的特异性比 BCG法(溴甲酚绿法)要好,不易受时间和温度变化的影响。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。 产品组成:
自备材料: 1、离心管、小试管 2、分光光度计、比色杯 操作步骤(仅供参考): 1、取 0.5ml白蛋白标准配制液或稀释液加入到白蛋白标准(20mg),充分溶解后配制成40mg/ml白蛋白标准溶液,配制后可立即使用,溶解后的白蛋白标准溶液应-20℃保存;特别提示:待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,白蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中,例如待测蛋白溶解于蔗糖,亦取白蛋白标准溶解于蔗糖,一般也可以用 0.9%NaCl或 PBS作为溶解白蛋白标准品的稀释液。 2、样本处理:血清、血浆样本直接取 5μl检测,对于组织样本,按组织质量(g):生理盐水(ml)=1:9比例,加入 9倍体积的生理盐水或 PBS,冰浴下匀浆后,2500g离心 10min,取 5μl上清待检。 3、配制 BCP试剂:按 0.1ml BCP贮存液入 100ml BCP空白试剂混合即可,混合后应 4℃避光保存,1个月有效。 4、白蛋白加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测**能设置平行管。
5、白蛋白测定:顺序加入 BCP试剂,并立即混匀,室温放置(30±3)s,空白管调零,比色杯光径 1cm,以分光光度计 603nm处测定标准管、测定管的吸光度(即 A标准、A测定)。 5、(备选步骤)当遇到脂血混浊,可设“样本空白管”:取 0.01ml待测样品加入 2ml BCP空白试剂,予以校正,以 BCP空白试剂调零,读取”样本空白管”的吸光度,用测定管的吸光度减去”样本空白管”的吸光度后的净吸光度,计算白蛋白浓度。 计算:白蛋白(g/L)=A测定/A标准×白蛋白标准液浓度(g/L) 参考区间: 健康成年人:36~46g/L 注意事项: 1、白蛋白标准粉末溶解于白蛋白标准配制液后,即获得白蛋白标准原液,该原液中含有防腐剂,不影响后续检测,该蛋白标准原液-20℃长期保存。 2、如果没有分光光度计,也可以使用酶标仪测定,使用酶标仪测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著增加。 3、本法线性范围是 10~50g/L,在 10~40g/L呈良好线性范围。 4、CV可达 0.45%,回收率可达 99.3%~102%,平均回收率达 100.5%。 5、该法测定正常样本的批间变异系数为 6.3%。 6、经 Leagene测定白蛋白标准溶液(40mg/ml)其吸光度减去空白吸光度差值在0.35~0.5之间;如果样品浓度过低,可能导致测定管吸光度与标准管吸光度之间差异不大,其避免方法为:增加标准品和(或)待测样品的量以提高差异性,可使标准品和(或)待测样品从 10μl增加至 50μl之间的量。其计算公式应调整为:白蛋白(g/L)=A测定/A标准×白蛋白标准液浓度(g/L)×(10/实际加入样品微升数)。 有效期:6个月有效;常温运输,4℃保存,白蛋白标准配制成溶液后应-20℃冻存。 附录:参考标准曲线图,Leagene测定白蛋白标准溶液(40mg/ml)其吸光度减去空白吸光度差值在 0.35~0.5之间;如果样品浓度过低,可能导致测定管吸光度与标准管吸光度之间差异不大;Leagene测定白蛋白标准溶液的浓度依次为 4、8、16、24、32、40mg/ml,测出其相应的吸光度,据此做出如下标准曲线。 |
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