单胺氧化酶(Monoamine Oxidase，MAO)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶，属于细胞外酶，含有铜离子，分布于肝脏、肾脏等组织的线粒体内，其含量分布为肝脏＞心脏＞肾脏＞脑＞肺＞骨骼肌，血小板、胎盘中也含有 MAO。线粒体中的 MAO与膜紧密结合，仅少量为可溶性的，存在于细胞质中，血液和结缔组织中的 MAO为水溶性。

单胺氧化酶 (MAO)检测试剂盒 (醛苯腙微板法 )其检测原理是待测样品在 MAO作用下，氧化底物苄胺生成苄醛，后者经催化反应生成醛苯腙呈棕红色，通过酶标仪检测 470nm处吸光度，根据标准曲线即可测出 MAO活力，100T试剂盒可检测样本数约为45个。该产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、蒸馏水

2、离心管或小试管、精密天平

3、酶标仪、96孔板、恒温箱或水浴锅

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，用于 MAO的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于 MAO的检测。

③高活性样品：如果样品中含有较高活性的 MAO，可以使用 MAO Assay buffer稀释。

2、稀释标准品：用 MAO Assay buffer稀释苄醛标准(5mmol/L)至 0.5mmol/L，即为苄醛标准工作液(0.5mmol/L)，4℃保存备用，按下表制备标准曲线。

3、 MAO加样：按照下表设置空白管、对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入(96孔板中)，并注意避免产生气泡。如样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

4、MAO测定：混匀，96孔板中以蒸馏水调零，酶标仪 470nm处测定各孔吸光度(记为 A_空白、A_标准、A_对照、A_测定)。

计算： MAO活性单位的定义：在 37℃ 1ml血清中 MAO 1h催化底物产生 1nmol苄醛为一个 MAO酶活力单位，根据酶活性定义计算出样品中的 MAO活性。

以 60μl系列标准品(1～6号)所含苄醛 nmol数对应的 MAO活性单位(nmol/h∙ml)为横坐标，以(A标准-A空白)吸光度之差值为纵坐标，绘制标准曲线，用待测样品(A测定-A对照))吸光度之差值在标准曲线上查出待测样品的 MAO活性。当酶活力高于 200U/ml时，应将样品适当稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。

标准曲线制作中各管 MAO活性单位(U/ml或 nmol/h∙ml)

=苄醛 nmol数/(2×0.016)

=苄醛 nmol数×31.25

血清 MAO活力(U/ml或 nmol/h∙ml)

=苄醛 nmol数×N/(t×Vs)

=苄醛 nmol数×31.25×N

=标曲中查出的样品 MAO活性×N

组织 MAO活力(U/mg或 nmol/h∙mg)

=苄醛 nmol数×VT×N/(t×Vs×m)

=苄醛 nmol数×31.25×VT×N/m

=标曲中查出的样品 MAO活性×VT×N/m

式中：VT=待测样品总体积(ml)

N=待测样品检测前的稀释倍数

Vs=检测时所用样品体积(ml)=0.016

t=反应时间(h)=2

m=待测样品质量(mg)

注意事项：

1、胆红素浓度小于 257μmol/L，血红蛋白浓度小于 4g/L，对 MAO活力检测没有影响。

2、标准曲线制作中各管苄醛 nmol数乘以 31.25得 MAO活性单位数。

3、若将上述定义的酶活性单位更换为国际单位，应除以 60。

4、加入苄醛显色缓冲液后，应 1h内检测完毕。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。4℃运输，4℃保存。

附录：参考标准曲线范围：Leagene在室温条件下通过分光光度计 470nm测定 MAO活性标准在 0、12.5、25、50、100、150、200U/ml时的吸光度，并做出其标准曲线如下：

注意：由于检测仪器和操作手法等条件的不同，参考值范围会有不同，该值仅供参考，对于要求精确计算苄醛含量的，可以进行多点重复测定；根据 Leagene测定经验显示12.5U/ml以下、200U/ml以上标准曲线会有偏差。