茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚微板法)
产品介绍
茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是茶叶中多酚类物质的总称,包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等,是一类儿茶素为主体的黄酮化合物,儿茶素占 60~80%,具有 C6-C3-C6碳骨架结构,是一种重要的天然抗氧化物质,能够清除自由基。类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁,是形成茶叶色香味的主要成份之一,也是茶叶中有保健功能的主要成份之一,研究表明茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用,能有效地阻止放射性物质侵入骨髓,并可使锶 90和钴 60迅速排出体外。 茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚微板法)参考国家标准 GB/T 8313而来,其检测原理是利用福林酚氧化茶多酚中的酚羟基-OH,使其显蓝色,用分光光度计或酶标仪测定765nm(或 600nm)处吸光度,在一定范围内吸光度与颜色深浅的变化成正比,与标准曲线比较,进而计算出茶多酚的含量,主要用于测定植物组织样品中茶多酚含量,尤其适用于茶叶。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。 产品组成:
1、茶叶、绿茶等待测样本、蒸馏水、甲醇 2、研钵、200目细胞筛、水浴锅或电炉 3、离心机、离心管或试管、96孔板、酶标仪水浴锅或电炉 操作步骤(仅供参考):1、准备样品: ①固体样品:称取 1g植物样品,充分研磨成粉末,称取 0.2g加入 10ml离心管中,再向其中加入在 70℃水浴中预热的 70%甲醇水溶液 5ml,盖紧并使样品湿润,立即放入70℃水浴中浸提 10min(每隔 5min晃动 1次),浸提后冷却至室温,3500r/min离心10min,转移上清液至 10ml容量瓶,向样品残渣再加入 5ml 70%甲醇水溶液浸提一次,重复上述操作;合并上清液并定容至 10ml,摇匀,即为茶多酚提取液;4℃避光保存,用于茶多酚的检测。 ②绿茶、血浆、血清和尿液等液体样品:绿茶样品可直接用该试剂盒测定;血浆、血清按照常规方法制备后可直接用本试剂盒测定。 2、配制系列茶多酚标准:用蒸馏水和茶多酚标准(1mg/ml),按下表进行操作,依次稀释。
3、配制福林酚工作液:按照福林酚试剂:蒸馏水=1:9的比例,现配现用,不宜长期保存。 4、 TP加样:取 96孔板,按照下表设置空白孔、对照孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品中的 TP浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测**能设置 2平行孔,求平均值。
5、 TP测定:以空白孔调零,酶标仪测定 765nm(或 600nm)处各标准孔、测定孔的吸光度。 计算:以系列茶多酚标准浓度(1~7号)(5、10、20、40、60、80、100μg/ml)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程;以测定管吸光度代入回归方程求得提取液中 TP含量。 固体样品 TP含量(μg/g)= (C×VT×N)/W 式中:C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml) VT=提取液的总体积(ml) =10ml W=固体样品的质量(g) =0.2g N=提取液的稀释倍数 液体样本 TP含量(μg/ml)= C×N 式中:C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml) N=提取液的稀释倍数 注意事项:1、茶多酚提取液宜 4℃避光保存,且保存时间在 24h以内。 2、福林酚有一定的腐蚀性,请小心操作。 3、样品中茶多酚浓度过高,颜色反应将特别深,超出仪器的检测范围,应用蒸馏水适当稀释重新检测。 4、该试剂盒测定标准品时,肉眼可见,浓度小于 10μg/ml时呈浅蓝色,20~60μg/ml时呈蓝色,大于 80μg/ml时呈深蓝色。 附录:参考标准曲线范围: Leagene测定茶多酚标准在 5、10、20、40、60、80、100 μg/ml时的吸光度,据此作出其参考标准曲线如下:注意:由于检测仪器和操作手法等条件的不同,参考值范围会有波动,该值仅供参考。 有效期:6个月有效;4℃运输,4℃保存。 |
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