Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。

谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH₄⁺，引起340nm处吸光度的上升，通过测定340nm吸光度的变化，计算谷氨酸含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

1.试剂三：临用前加入20ml试剂一；

2.试剂四：临用前加入1.5ml试剂二；

3.标准液：10μmol/ml谷氨酸标准品。

技术指标：

最低检出限：0.0037μmol/ml

线性范围：0.0125-0.2μmol/ml

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

细菌、细胞或组织样品：收集细胞或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1ml试剂一，超声波破碎细菌或细胞(功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次)，10000rpm，常温离心10min，取上清待测。

称取约0.1g组织，加入1ml试剂一进行冰浴匀浆，10000rpm，常温离心10min，取上清待测。

二、测定步骤

1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2.标准溶液的制备 ：将标准品分别稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/ml的标准溶液。

3.在有盖EP管中加入下列试剂：

(1)标准管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算∆A=A2-A1。

(2)测定管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算∆A=A2-A1。

三、谷氨酸含量计算：

1.标准曲线的绘制：以谷氨酸含量(μmol/ml)为x轴，标准管∆A为y轴，绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值

(μmol/ml)。

2.氨基酸含量计算：

(1)按照蛋白浓度计算：谷氨酸含量(μmol/mg)=x×V样本÷(Cpr×V样本)=x÷Cpr

(2)按照样品鲜重计算：谷氨酸含量(μmol/g质量)=x×V样本÷(W÷V样总×V样本)=x÷W

(3)按照细菌或细胞数量计算：谷氨酸含量(μmol/10⁴ cell)＝x×V样本÷(1000÷V样总×V样本)=0.001x。

V样总：加入提取液体积，1ml；V样本：加入的样本体积，0.04ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g；1000：细菌或细胞总数，1000万。

注意事项：

如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。