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半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)测试盒(可见分光光度法)
货号:CSL-2-Y
包装:50管/24样


产品介绍

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)广泛存在于百合科葱属(如大蒜和洋葱),十字花科芸薹属(如卷心菜,菜花,西兰花),以及豆科中的合金欢属中,并通常被称为蒜氨酸酶(Alliinase)。 香菇酸在γ-谷氨酰转肽酶和半胱氨酸亚砜裂解酶的作用下转化成香菇精,以及产生丙酮酸、 乙醛、甲醛和 NH3。CSL 是内源性甲醛生成的关键酶之一,测定 CSL 活性对于研究食品安全具有重要意义。

测定原理

CSL 催化 S-甲基-L-半胱氨酸亚砜反应产生丙酮酸,与 2,4-二硝基苯肼反应,在碱性条件下显棕红色,在 510nm 下有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃避光保存,临用前加入 2mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存,临用前加入 10mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃ 保存;

试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。 试剂四:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。 试剂五:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。

样本处理

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆,4℃浸提 40min。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定操作


对照管测定管
样品(μL)100100
试剂一(μL)
50
蒸馏水(μL)50
试剂二(μL)5050
充分混匀,37℃反应 20min
试剂三(μL)200200
试剂四(μL)100100
充分混匀,室温反应 5min
试剂五(μL)500500
充分混匀,静置 5min,于 1mL 玻璃比色皿测定 510nm 处吸光值,记为 A 对照和A 测定,△A=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。

计算公式

标准曲线:y = 1.4626x + 0.0027,R2 = 0.9993;x 为标准品浓度:μmol/mL;y 为吸光度△A

1. 按蛋白含量计算

C-S lyase 活性(μmol/min/mg prot)=(△A -0.0027)÷1.4626×V 样÷(V 样×Cpr )÷T=0.034×(△A-0.0027)÷Cpr

2.  按照样本质量计算

C-S lyase 活性(μmol/min/g  鲜重)=(△A -0.0027)÷1.4626×V 样÷(V 样÷V 样总×W )÷T=0.034×(△A-0.0027)÷W

V 样,加入样本上清体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T,反应时间,20min。

注意事项

1.   若测定结果中吸光值超过 2,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。香菇类样本活性较大,可能需要稀释 80-100 倍。

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