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半纤维素含量测试盒(可见分光光度法)
货号:BXW-2-G
包装:50管/48样


产品介绍

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物,是构成细胞初生壁的主要成分,广泛存在于植物中,是一种新型可利用能源。

测定原理

半纤维素经酸处理后转化成还原糖,与 DNS 生成红棕色物质,在 540nm 有特征吸收峰,其吸光值的大小反映了半纤维素含量的高低。

需自备的仪器和用品

天平、40 目筛,恒温水浴锅、烘箱、分光光度计、1mL 玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮

试剂的组成和配制

试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。如有沉淀,80℃加热溶解。

试剂二:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

样品处理

1、样品 80℃烘干至恒重,粉碎,过 40 目筛。称取 0.01g 样本,加入 80%乙醇 1mL,90℃水浴 30min,冷却至室温,8000g 25℃离心 10min,弃上清留沉淀,80℃烘干。

2、在上述烘干的沉淀中加入 1mL 试剂一,充分混匀后,95℃水浴 60min,取出冷却后,8000g 25℃离心 10min,弃上清留沉淀,用蒸馏水清洗 3 次(加入 1mL 蒸馏水混匀即可),8000g 25℃离心 10min,弃上清留沉淀,再用丙酮清洗 1 次(加入 1mL 丙酮混匀即可),8000g 25℃ 离心 10min,弃上清留沉淀,80℃烘干。

3、在上述烘干的沉淀中加入 1mL 试剂二,95℃水浴 30min,取出冷却后,8000g 25℃离心10min。取上清 500μL,加入 500μL 试剂三,混匀后待用。

注意:

1、80℃烘干的时间为 2 小时,依据样本情况可延长烘干时间。

2、90℃或 95℃加热过程中 EP 管可能爆开,建议用胶带封口或使用带螺旋盖的防爆 EP 管。

测定操作表

在 EP 管中依次加入如下试剂


空白管测定管
上清(μL)
240
蒸馏水(μL)240
试剂四(μL)180180
蒸馏水(μL)780780

充分混匀,90℃水浴5min,自然冷却,25℃,8000g离心10min,取1mL上清液于96孔板,测定540nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管,ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

计算公式

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.5812x + 0.0609,R2= 0.9931;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

2、半纤维素含量(mg/g 干重)=(△A- 0.0609)÷ 0.5812÷(W÷V 样总)= 3.44×(△A- 0.0609)÷W

W:样品质量,g;V 样总:加入提取液体,2mL。

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