产品说明
一般描述
组分
Protector RNase抑制剂(40 U/μl)储存液：20 mM HEPES-KOH，50 mM KCl，8 mM 二硫苏糖醇, 50% 甘油(v/v)pH 7.6左右(+4℃)。
Protector RNase抑制剂可广泛灭活各种RNase，包括
- RNase A
- RNase B
- RNase T2
- 在cDNA合成反应RT-PCR期间或体外转录/翻译反应过程中保护mRNA(在传统热循环和qPCR系统中)
- 在体外病毒复制期间保护病毒RNA
- 在RNA分离纯化期间抑制核糖核酸酶
- 用于RNase保护测定
- 帮助制备不含RNase的抗体
特异性
Protector RNase抑制剂完全不会对RNase T1与RNase 1造成影响。
Protector RNase抑制剂(20 U/ 20 μl反应)能够抑制多达1 ng RNase A，160pg RNase B以及0.03 U/μl(反应体系)RNase T2的活性。
RNase H的活性不受Protector RNase抑制剂的抑制。
热灭活：> 65 ℃
应用
Protector RNase抑制剂可用于：
- 在cDNA合成反应RT-PCR中保护mRNA(在传统热循环和qPCR系统中)例如，通过LightCycler®设备、体外转录/翻译系统、RNase保护测定、体外RNA合成等
- 在体外病毒复制期间保护病毒RNA
- 在RNA分离纯化期间抑制核糖核酸酶
- 帮助制备不含RNase的抗体
- 合成用于原位杂交的RNA探针
特点和优势
- 基于热稳定性的RNase抑制剂：即使使用热稳定性逆转录酶(如Transcriptor逆转录酶)的条件下，Protector RNase抑制剂仍保持稳定。
- 兼容广泛的反应条件：Protector RNase抑制剂在pH 5.0至9.0条件下和+25℃至+55℃的温度下都具有活性(+60℃时仍保留部分活性)。
- 避免各种RNA分析应用中的干扰：即使升高到标准浓度的16倍仍保持正常效能。
- 持续提供高纯度产物：每一批次的产品都进行严格质控流程，经实时定量RT-PCR等标准技术检测，确保不含核酸内切酶、核糖核酸酶或切割活性。
质量
每一批次的Protector RNase抑制剂均使用Titan One Tube RT-PCR试剂盒和LightCycler DPD试剂盒进行功能测试。Protector RNase抑制剂还经过污染活性测试，如下所述。
测试缓冲液：50 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，0.1 mM EDTA，7 mM β-巯基乙醇；pH 7.5 (+37℃)。
不含核酸内切酶：在+37℃下，将1 μg的λDNA-EcoR I/Hind III*片段与Protector RNase抑制剂在50 μl测试缓冲液中一起孵育1小时。“核酸内切酶(Endo)”部分描述了不会导致带型发生变化的抑制剂用量。
不含开口活性：在+37℃下，将1 μg的超螺旋pBR322 DNA与Protector RNase抑制剂在50 μl测试缓冲液中一起孵育1小时。“开口活性(Nick.Act.)”部分描述了不会导致超螺旋DNA松弛的抑制剂用量。
不含核糖核酸酶(1)：在+37℃下，将5 μg的MS2 RNA与Protector RNase抑制剂在50 μl测试缓冲液中一起孵育1小时。“RNase 1”部分描述了不会导致MS2 RNA降解的抑制剂用量。
不含核糖核酸酶(2)：在+37℃下，将5 μg的MS2 RNA与Protector RNase抑制剂在50 μl测试缓冲液中一起孵育1小时，然后在 +65℃孵育10分钟。“RNase 2”部分描述了不会导致MS2 RNA降解的抑制剂用量。
单位定义
1单位Protector RNase抑制剂定义为将5ng RNase A的活性抑制50%所需的酶量。
单位检测：按照Blackburn测试法，通过抑制环状胞苷-2'：3'-单磷酸的水解测定活性。在实验条件下，200U的Protector RNase抑制剂能够将1 μg RNase A的活性抑制50%。
体积活性：40 U/μl
制备说明
工作浓度：
- 一步法RT-PCR中使用5至10 U
- 两步法RT-PCR中使用25至50 U
- 体外转录使用20 U
也不会对RT-PCR反应造成干扰。)
其他说明
产品详细说明：
来源：大鼠肺部；在大肠杆菌中进行重组
等电势点：pH 4.5
Protector RNase抑制剂的活性温度：25℃至+55℃；+60℃下仍具可测活力
失活条件：在强烈的变性条件(+65℃以上温度)下，本抑制剂将被失活
生物负载：<50 cfu/ml
DNA成份：<100 pg/mg
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
法律信息
购买注意事项：许可免责声明
本品针对聚合酶链式反应(PCR)进行了优化，后者由F. Hoffmann-La Roche Ltd ("Roche"，)的专利所保护。在这些专利的保护下，购买本品的购买者不会以明示或暗示的方式获得PCR方法的使用许可。将PCR法用于某类研究或开发活动的许可，需通过购买Roche、Applied Biosystems及其他许可供应商的试剂，并配合在授权的PCR仪上使用来获得，也可通过联系Applied Biosystems来购买。(如用于)诊断目的则需要获得Roche的许可。如需购买许可方面的详细信息，请联系Applied Biosystems(850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA)的授权主管。
LightCycler is a registered trademark of Roche
产品性质
| 质量水平 | 100 |
| 测定 | >95% (SDS-PAGE) |
| 分子量 | ~50 kDa |
| 包装 | pkg of 10,000 U (03335402001 [5 x 2,000 U]) pkg of 2,000 U (03335399001) |
| manufacturer/tradename | Roche |
| 参数 | 25-55 ℃ optimum reaction temp. |
| pH范围 | 5.0 - 9.0 |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | −20℃ |
安全信息
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 1 |
| 闪点(F) | does not flash |
| 闪点(C) | does not flash |
