斐林试剂(Fehling's Reagent)又称菲林试剂或裴林试剂，是德国化学家Hermann von Fehling 1849年所发明。斐林试剂与班氏试剂(Benedict's Reagent)相似，均是用来检测还原糖的存在。其原理是与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。

还原糖检测试剂盒(斐林比色法)，主要由酒石酸钠钾、硫酸铜等组成。其测定原理是还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的Cu还原成Cu，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色程度与溶液中还原糖含量成正比，在590nm下可用比色法测定吸光度，查标准曲线即可计算出样品中还原糖的含量。本产品主要用于含淀粉食品、酒精饮料、碳酸饮料、肉制品、蜜饯等食品和植物等样品中还原糖的定量检测；总糖的含量也可以测定，但需要提前水解后才能检测，也可用于还原糖的定性试验。本产品仅用于科研。

产品组成：

自备材料：

1.试管或离心管

2.锥形瓶、容量瓶、玻璃珠

3.水浴锅或酒精灯

4.果糖、转化糖等还原糖标准(1mg/ml)

5.盐酸水溶液、氢氧化钠溶液

6.10%乙酸铅溶液、饱和硫酸钠溶液

7.蒸馏水、碘液

8.分光光度计、比色皿

操作步骤：

1.配置斐林试剂：Fehling's Reagent A液和B液等比例混合即成，不可久置。

2.配置pH中和液(1×)：pH中和液(10×)和水按1:9比例混合即成。

3.样品中还原糖的提取：

a、固体样品(如含淀粉食品、植物样品等)：称取粉碎或混匀后的试样10～20g(精确到0.01g)，置250ml容量瓶中，当体积接近150ml时，滴加1～3滴甲基红指示剂，如呈红色，可用pH中和液调至微黄色。若用风干样品，可称取3g，直接加入容量瓶，加入少量水湿润后，再加水至150ml左右加入指示剂和中和液。将容量瓶置于80℃的恒温水浴中保温30min，期间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。对于含蛋白质较多的样品，

此时可加入乙酸铅溶液除去蛋白质，至不再产生白色絮状沉淀时，加入饱和的硫酸钠溶液除去多余的铅离子。30min后取出冷却并定容至刻度，摇匀后取滤液备用。

b、酒精饮料：称取混匀后的试样100g(精确到0.1g)，置于蒸发皿上，滴加1～3滴甲基红指示剂，用pH中和液调至微黄色，在水浴上蒸发至原体积的1/4后，移入250ml容量瓶中，置于80℃的恒温水浴中保温30min，期间摇动数次。含蛋白质较多的样品参考上述方法。滤液备用。

c、碳酸饮料：称取混匀后的试样100g(精确到0.1g)，置于蒸发皿上，在水浴上微微搅拌除去二氧化碳后，移入250容量瓶中，用水洗涤蒸发皿，并入容量瓶，加水至刻度，混匀后备用。

d、总糖的水解和提取：称取植物样品0.5～3g，剪碎，加入蒸馏水约3ml匀浆，转移至三角烧瓶中，用12ml蒸馏水冲洗研磨器2～3次，冲洗液也转移至烧瓶中。向三角烧瓶中加入10ml 6M盐酸溶液，摇匀，煮沸30min，并不时搅拌。取2滴加于小离心管中，再滴加1滴碘液，检查水解是否完全，如已经水解完全，则不显示蓝色。水解完毕后，冷却至室温，滴加6M氢氧化钠溶液，使溶液pH接近中性。含蛋白质较多的样品参考上述方法。滤液或上清液用蒸馏水定容至100ml，混匀。取10ml，用蒸馏水定容至100ml，摇匀备用。

4.制作还原糖标准曲线：按下表设置空白管(0号)、梯度标准管(1～6号)，按顺序依次加入。

将各管混匀后，沸水浴加热15min。冷水或自来水冷却，2500r/min离心5～10min。

取上清，1cm比色皿，空白管调零，用分光光度计测590nm的吸光度值。以各标准管吸光度减去空白管吸光度的差值为纵坐标、对应葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。

5.样品还原糖的测定：

吸取准备好的还原糖提取液3ml，加入2ml斐林试剂，混匀。沸水浴加热15min。冷却、离心、取上清、测定等操作同标准曲线。空白管调零后，用样品管的吸光度值带入回归方程即可计算出样品中还原糖的含量。

结果计算：

样品还原糖含量(%)= m×VT ×N/(m0 ×VS ×1000)×100

式中：m=样品中还原糖的含量(mg) VT=提取液总体积(ml)

N=稀释倍数

m0 =样品质量(g) VS=测定时取用的提取液体积(ml)

1000=单位换算系数。

附：还原糖的定性试验

1.配制斐林试剂工作液：临用前，取适量试剂(A)、试剂(B)等量混合即成，即配即用。

2.向洁净试管中加入1～2ml待测样品。

3.向该试管中加入1ml斐林试剂工作液，充分摇匀。

4.将上述混合液置于沸水浴中，并持续1～3min。

5.观察试管内混合液颜色是否发生变化，其颜色变化顺序应为浅蓝色-棕色-砖红色(沉淀)。

鉴定结果：

还原性糖(如核糖、葡萄糖、果糖等)砖红色沉淀非还原性糖(蔗糖、淀粉等)无颜色变化

注意事项：

1.样品提取液中还原糖浓度过高时，应适当稀释后再行测定。

2.样品提取液中还原糖浓度过低时，可提高样品的浓度或增加提取液的用量。

3.可合理减少或增加提取液和斐林试剂的用量。

4.斐林试剂的A、B液须分开储存，临用前按要求混合使用。

5.斐林试剂B液呈强碱性，需小心操作。

6.6M盐酸配制：用市售盐酸和蒸馏水或去离子水等比例混合即成6M盐酸，该过程会放热，应小心操作，避免伤人。

有效期：12个月有效。