花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。

根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰，而当pH为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

按照样本质量(g)：提取液体积(ml)为 1：5～10的比例(建议称取约0.1g样本，加入1ml提取液)，充分匀浆后转移到EP管中，提取液定容至1ml，盖紧后60℃浸提30min，期间可震荡数次。12000rpm，常温离心10min，取上清液待测。

二、测定操作表：

1.可见分光光度计/酶标仪预热30min，蒸馏水调零。

2.加样表：在96孔板中分别加入

二、花色苷含量计算：

1.按样本质量计算

花色苷含量(μmol/g质量)=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W。

2.按样本蛋白浓度计算

花色苷含量(μmol/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×10³×F]×V提取÷(Cpr×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr。

F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：比色皿光径，1cm；W：样本质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10⁴ml/mmol/cm；V提取：提取液总体积，1ml；103：单位换算系数，1mmol=103μmol；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml(蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定)。

B、以96孔板计算：

1.按样本质量计算

花色苷含量(μmol/g质量)=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷W=0.062×ΔA× F÷W。

2.按样本蛋白浓度计算

花色苷含量(μmol/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷(Cpr×V提取)=0.062×ΔA×F÷Cpr。

F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：96孔板光径，0.6cm；W：样本质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10⁴ml/mmol/cm；V提取：提取液总体积，1ml；103：单位换算系数，1mmol=103μmol；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml(蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定)。

注意事项：

1.如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1ml不变，如10μL上清液和180μL试剂一(相当于稀释20倍)；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如100μL上清液和100μL试剂一(相当于稀释2倍)，使A1保持在0.1～1范围内，可提高检测灵敏度；注意应同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。

2.因提取液会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算需用PBS单独提取后自行测定。