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土壤过氧化氢酶(S-CAT)活性检测试剂盒(微量法)
包装:100管/48样


产品介绍

S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类,在H2O2清除系统中具有重要作用。

H2O2在240nm下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即可反应S-CAT活性的高低。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂一液体0.3ml×1瓶4℃
试剂二粉剂×1支4℃
试剂三液体3ml×1瓶4℃

溶液的配制:

1.试剂一:液体置于试剂瓶内EP管中。临用前取0.1ml试剂一加入9.9ml蒸馏水稀释待用或者按比例配制。用不完的试剂4℃保存;

2.试剂二:临用前加入1ml蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、蒸馏水、30~50目筛。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。二、测定步骤

1.分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至240nm,蒸馏水调零。

2.加样表:

试剂名称测定管无基质管无土管
风干土样(g)0.030.03
试剂一(μL)260
260
双蒸水(μL)
260
25℃振荡培养 20min
试剂二(μL)101010
混匀 8000g,25℃离心 5min,取全部上清
试剂三(μL)303030

混匀,取 200μL至微量石英比色皿或 96孔板中,240nm处记录各管吸光值 A。(每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做 1-2管)

三、S-CAT 活性计算

A.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

单位的定义:每天每 g风干土样催化 1mmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式:S-CAT(U/g土样)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷(ε×d)×103]÷W÷T=16.5×(A无土管-A测定管+A无基质管)

V反总:反应体系总体积,3×10-4 L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,43.6L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;T:反应时间,20min=1/72d;W:样本质量,0.03g。

B.用 96孔板测定的计算公式如下

单位的定义:每天每 g风干土样催化 1mmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式:S-CAT(U/g土样)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷(ε×d)×103]÷W÷T=27.5×(A无土管-A测定管+A无基质管)

V反总:反应体系总体积,3×10-4L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,43.6L/mol/cm;d:96孔板光径,0.6cm;T:反应时间,20min=1/72d;W:样本质量,0.03g。

注意事项:

如果吸取的上清仍有部分浑浊,可以在加入试剂三后统一再次进行离心。

相关发表文献:

Hou Q,  Wang W, Yang Y,  et  al.  RhizospHere  microbial  diversity  and community  dynamics during potato cultivation[J]. European Journal of Soil Biology, 2020, 98: 103176.

参考文献:

[1]杨兰芳,曾巧,李海波, et al.紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性[J].土壤通报, 2011, 42(1):207-210. [2] Johansson L H, Borg L A H. A spectropHotometric method for determination of catalase activity in small tissue samples[J]. Analytical biochemistry, 1988, 174(1): 331-336.

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