果胶裂解酶(EC 4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分，催化果胶分子链的消除裂解。来源比较广泛，主要来源于微生物，在食品加工工业中提高果汁产量方面有重要意义，在减少环境污染和降低能源消耗方面也具有潜在的应用价值。

果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键，生成在还原端C₄和C₅之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，在235nm处有特征吸收峰，测定235nm下吸光度的上升来表示果胶裂解酶的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

试剂一：溶液中如果有沉淀存在，可以50℃水浴助溶。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、恒温水浴锅、1ml石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.组织：按照组织质量(g)：提取液体积(ml)为1：5～10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液)，进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量(104个)：提取液体积(ml)为500～1000：1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

3.培养液：直接测定。

二、测定操作

1.分光光度计预热30min以上，调节波长至235nm，蒸馏水调零。

2.操作表：(在1.5ml离心管中)。

测定管=A2测定管-A1测定管，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。

三、果胶裂解酶活性计算

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷(V样×Cpr)÷T=64.1×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(U/g质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷(V样×W÷V样总)÷T= 64.1×ΔA÷W

3.按照细菌、真菌数量计算

酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(U/10⁴cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T= 64.1×ΔA÷细胞数量

4.按照培养液体积计算

酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(U/ml)=ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷V样÷T= 64.1×ΔA

ε：不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数：5200L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.001L；V样：反应体系中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min；109：换算系数，1mol=109nmol。

注意事项：

1.若ΔA大于0.5，将粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。若A测定管大于1.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。

2.建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。

3.空白管正常情况下变化不超过0.02。