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脂氧合酶(LOX)测试盒(微量法)
货号:LOX-1-W
包装:100管/48样


产品介绍

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

LOX广泛存在于动植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在生物体的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

测定原理:

LOX催化亚油酸氧化,氧化产物在 280nm处有特征吸收峰;测定 280nm吸光度增加速率,来计算 LOX活性。

自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 100ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体 20ml×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1支,4℃保存。

粗酶液提取:

按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1ml试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

测定:

1.分光光度计/酶标仪预热 30 min以上,调节波长到 280 nm,蒸馏水调零。

2.在试剂三中加入 10ml试剂二(振荡混匀 1min),在 30℃水浴中预热 10 min以上。用不完的试剂 4℃保存。

3.对照管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入 20μL样本和 180μL试剂二,30℃反应30min后,记录 A对照。

4.测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入 20μL样本和 180μL试剂三,30℃反应30min后,记录 A测定。

5.ΔA=A测定-A对照

LOX活性计算:

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1个酶活单位。

LOX (U/mg prot) =ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷T×100= 33.33×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1个酶活单位。

LOX (U/g鲜重) =ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×100= 33.33×ΔA÷W

Cpr:上清液蛋白浓度,mg/ml,需另外测定,建议使用本公司 BCA蛋白质含量测定试剂盒; V反总:反应体系总体积,200μL=0.2ml;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02ml; W :样品质量,g;V样总:上清液总体积,1ml;T:反应时间,30min。

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