正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是糖运输形式之一，而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此，在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含量变化。

测定原理：

山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物，在 655nm波长有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 10mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体 10mL×1瓶 ，4℃保存。

山梨醇的提取：

按照组织质量(g)：蒸馏水体积(mL)为 1：5～10的比例(建议称取约 0.2g组织，加入 2mL蒸馏水)，研磨成匀浆， 95℃水浴 10分钟(盖紧，以防止水分散失)，冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。

测定步骤

1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至 655nm，蒸馏水调零。

2、加样表(在 EP管中依次加入下列试剂)：

混匀后室温静置 15min，8000g，25℃离心 10min，取上清液测 655nm下吸光值 A，计算 ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

山梨醇含量计算：

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.352x - 0.002；x为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值。

2、按照样本质量计算

山梨醇含量(mg/g鲜重)＝[(ΔA＋0.002)÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002)÷W

3、按照样本蛋白浓度计算

山梨醇含量(mg/mg prot)＝[(ΔA＋0.002)÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002)÷Cpr

V1：加入样本体积，1mL；V2：加入提取液体积，2 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g

注意：最低检测限为 1μg/g 鲜重或 0.01μg/mg prot