产品组分
| P1071 | | |
| HSTM Taq DNA聚合酶 | 5 U/μl | 50 μl |
| 10×HSTM PCR缓冲液(Mg2+ Plus) | | 1.4 ml |
| 6×上样缓冲液 | | 1 ml |
| P1072 | | |
| HSTM Taq DNA聚合酶 | 5 U/μl | 100 μl |
| 10×HSTM PCR缓冲液(Mg2+ Plus) | | 1.4 ml |
| 6×上样缓冲液 | | 1 ml |
| P1073 | | |
| HSTM Taq DNA聚合酶 | 5 U/μl | 200 μl |
| 10×HSTM PCR缓冲液(Mg2+ Plus) | | 1.4 ml×2 |
| 6×上样缓冲液 | | 1 ml |
| P1074 | | |
| HSTM Taq DNA聚合酶 | 5 U/μl | 100 μl×18 |
| 6×上样缓冲液 | | 1 ml |
注：1、HSTM Taq DNA聚合酶分为2.5 U/μl与5 U/μl两种包装，可自由选择，如没特别说明提供5 U/μl的包装。
2、10×PCR 缓冲液分为Mg2+ Plus与Mg2+ Free两种包装，可方便选择。如没特别说明提供Mg2+ Plus缓冲液。Mg2+ Free的 10×PCR 缓冲液提供25 mM MgCl2。
3、电泳时，请按每5 μlPCR反应液中加入1μl的比例添加6×上样缓冲液 混合后进行电泳。
保存条件
-20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。
产品说明
HSTM Taq DNA聚合酶(High Specificity Taq DNA polymerase)是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高，易产生非特异性条带的情况，专门研制的高特异性嗜热DNA聚合酶产品。本产品的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良，使得引物与模板的特异性结合力显著增强，从而提高引物与模板结合的严谨性，减少非特异性扩增。实验数据证明。 HSTM TaqDNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性，降低背景，又能对长片段有较高的扩增效率。
产品特点
热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min。
PCR产物具有3'-dA，可直接用于T/A克隆。
扩增特异性高。
产品用途
常规PCR扩增
DNA标记
DNA测序
制备TA克隆用PCR产物
活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，扩增活性无明显改变。
10×PCR缓冲液
500 mM KCl
100 mM Tris-Cl
15 mM MgCl2
1% Triton-100
酶贮存液
20mM Tris-HCl
1mM DTT
0.1mM EDTA
100mM KCl
50 % Glycerol
1% Triton-100
应用举例
注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
以λDNA为模板，扩增1kb片段。
| λ DNA(2.5 ng/μl) | 1 μl |
| 引物1 (10 μM) | 2 μl |
| 引物2 (10 μM) | 2 μl |
| 10×PCR 缓冲液 | 5 μl |
| dNTP混合物(2.5 mM) | 4 μl |
| HSTM Taq(5 U/μl) | 0.25 μl |
| 超纯水 | 补足至50 μl |
PCR反应条件
| 95℃ | 3 min |
| 95℃ | 30 sec |
| 55~68℃ | 30 sec 30 Cycles |
| 72℃ | 1 min |
| 72℃ | 10 min |
注意事项
1、HSTM Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。
2、碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。HSTM Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。
3、建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
4、模板DNA推荐用量(50 μl 标准PCR体系)
| 人类基因组DNA | 0.1 μg ---1 μg |
| λDNA | 0.5 ng---5 ng |
| 质粒DNA | 0.1 ng-10 ng |
| 大肠杆菌DNA | 10 ng-100 ng |
5、如进行PCR扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的Taq酶用量，以增加PCR扩增反应的特异性。
问：如何利用HSTM Taq DNA聚合酶进行加A反应？
答：由高保真DNA 聚合酶(如Pfu)产生的PCR 扩增片段的纯化产物1-7μl；
加入1μl HSTM Taq DNA 聚合酶10×反应缓冲液(含MgCl2)；
加入dATP 至终浓度0.2 mM；
加入5 U的HSTM Taq DNA 聚合酶；
加超纯水至终反应体积为10μl；
70℃孵育15-30 分钟；
进行TA克隆。
