产品组分
| P2071 | | |
| 2×FSTM Mix | 1ml | 1支 |
| 超纯水 | 1ml | 1支 |
| P2072 | | |
| 2×FSTM Mix | 1ml | 1支×5 |
| 超纯水 | 1ml | 1支×5 |
注： 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
保存条件
-20℃保存2年。
请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。
产品说明
FSTM Mix是2×浓缩的快速高效PCR预混和溶液，含有FSTM Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染(加样次数减少)。FSTM Mix的反应体系经特殊优化，减少引物二聚体的形成，显著提高PCR扩增的特异性。同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3'-dA突出端。
FSTM Taq DNA 聚合酶 是东盛根据蛋白工程原理，以Taq DNA 聚合酶为基础研发的新型DNA聚合酶。本产品具备类似KOD酶快速扩增能力，延伸速度可达3 kb/min，是普通Taq DNA 聚合酶的3倍，可缩短一半以上的PCR扩增时间。同时具备普通Taq DNA 聚合酶扩增效率高、适应性广等优点。
产品特点
高特异性
使用方便：仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
快速、高效：减少加样步骤，节约时间。
可重复：降低污染和加样错误风险
产品用途
高特异性PCR检测
高通量PCR检测
高重复性PCR检测
制备TA克隆用的PCR产物
活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，扩增活性无明显改变。
应用举例
注：以下反应举例为25 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
以λDNA为模板，扩增1kb片段。
| λ DNA(2.5 ng/μl) | 0.5μl |
| 引物1 (10 μM) | 1 μl |
| 引物2 (10 μM) | 1 μl |
| 2×FSTM Mix | 12.5 μl |
| 超纯水 | 补足至25 μl |
PCR反应条件
多数模板的快速扩增条件
| 94℃ | 4 min |
| 94℃ | 30 sec |
| 55~68℃ | 30 sec 30 Cycles |
| 72℃ | 20 sec |
| 72℃ | 2 min |
1kb简单模板的快速扩增条件
| 95℃ | 3min |
| 95℃ | 15 sec |
| 55~68℃ | 15 sec 30 Cycles |
| 72℃ | 20 sec |
| 72℃ | 2 min |
注：由于1 kb简单模板的二级结构简单，且长度较短，可同时缩短变性、退火时间至15 s，以实现快速扩增。
注意事项
1、使用本产品时，引物、模板、dNTP用量跟普通PCR Mix的一样，为实现快速扩增，请尽量选用小体反应体系。
2、退火温度一般为TM-5℃或TM-8℃，稍低的退火温度有利于实现快速扩增。
3、延伸时间视片段长度而定。一般情况，≤500 bp目的片段延伸15 s；500 bp-1 kb目的片段延伸20 s；＞1 kb目的片段，延伸时间按 20s/kb计算，如1.5 kb目的片段延伸30 s、3 kb目的片段延伸60 s。
4、FSTM Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3'末端通常会加上一个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
5、建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
6、50μl PCR反应体系中模板DNA推荐用量
| 人类基因组DNA | 0.1μg------1μg |
| λDNA | 0.5ng--------5ng |
| 质粒DNA | 0.1ng------10ng |
| 大肠杆菌DNA | 10ng-----100ng |
Q&A
问：使用FSTM Mix 扩增时是否需要使用快速PCR扩增仪？
答：不需要，使用普通的PCR扩增仪即可。
问：FSTM Mix 的使用与普通PCR Mix 有何不同？
答：使用方法与普通Taq Mix 基本相同，只需注意扩增条件中时间适当缩短。
问：FSTM Mix 扩增产物是否可用于TA克隆？
答：FSTM Taq DNA 聚合酶 没有3-5外切酶活性，所以PCR产物末端带 A，可进行TA克隆。
