限制性内切酶Nb.BsmI

• 这是一种切刻内切酶
• 产生的“DNA”分子是切刻的，而不是切断的
• 限制性内切酶酶切位点：GAATGC

Nb.BsmI 是一种切刻内切酶，仅切割双链 DNA 底物上的一条链。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）NUB 36 （N. Welker）的 BsmI 基因

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，65℃ 下，1 小时内将 1 µg 超螺旋质粒 pBR322 DNA 转换为开环 DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X NEBuffer™ r3.1
  Incubate at65℃

  1X NEBuffer™ r3.1
  100 mM NaCl
  50 mM Tris-HCl
  10 mM MgCl₂
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ r1.1: <10%
  NEBuffer™ r2.1: 50%
  NEBuffer™ r3.1: 100%
  rCutSmart™ Buffer: 10%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  100 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  50% Glycerol
  200 µg/ml BSA
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  80℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam 甲基化: 不敏感
  dcm 甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

  在不同温度下的活性

  @37℃: 100%

• 注意事项
  1. 在 NEBuffer r1.1 和 rCutSmart 缓冲液中使用 Nb.BsmI 可能导致 DNA 双链断裂。建议温育时间不超过 4 小时。
  2. 如需了解该酶（以及其他切刻酶）在不同温度下活性的详细信息，请参阅不同温度对切刻内切酶的影响。
  3. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。
  4. Nb.BsmI 在 37℃ 下具有 100% 活性，但在 37℃ 下温育过夜，星号活性显著提高。

• 参考文献
  1. Song, Q. et al. Anal. Chem. [Epub ahead of print].
  2. Zhang, P. et al. (2010). Protein Expr. Purif. 69, 226-234. [Epub 2009 Sep 9].