限制性内切酶Nt.AlwI

• 在 rCutSmart^™ 缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• 这是一种切刻内切酶
• 产生的 DNA 分子是“切刻”的，而不是切断的
• 限制性内切酶酶切位点：GGATC(4/-5)

Nt.AlwI 是一种切刻内切酶，仅切割双链 DNA 底物上的一条链。该酶是 AlwI 经基因工程改造的衍生物，仅切割双链 DNA 的上链，在识别序列 3´端外的第 4 个碱基处产生切刻。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有编码 AlwI 的 DNA 识别域和 Nt.BstNBI 的切割/二聚化结构域的嵌合基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 下，1 小时内将 1 µg 超螺旋 pUC101 DNA（dam-/dcm-）转化为开环型所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ r1.1: 10%
  NEBuffer™ r2.1: 100%
  NEBuffer™ r3.1: 100%
  rCutSmart™ Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 µg/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  80℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam 甲基化: 阻断酶切
  dcm 甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

• 注意事项
  1. dam 甲基化阻断该酶酶切。如需了解更多信息，请参阅 Dam-Dcm 和 CpG 甲基化。
  2. 如需了解该酶（以及其他切刻酶）在不同温度下活性的详细信息，请参阅不同温度对切刻内切酶的影响。

• 参考文献
  1. Song, Q. et al. (2010). Anal.Chem. [Epub ahead of print].
  2. Zhang, P. et al. (2010). ProteinExpr. Purif. 69, 226-234. [Epub 2009 Sep 9].