限制性内切酶ApaLI

• 符合省时酶（Time-Saver™）标准，可在 5-15 分钟内完成酶切
• 在 rCutSmart^™ 缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• 酶切位点：G/TGCAC

产品来源

大肠杆菌菌株，携带来自巴氏醋酸杆菌（Acetobacter pasteurianus）（ATCC 12875）的 ApaLI 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内酶切 1 µg λ DNA（HindIII 消化）所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ r1.1: 100%
  NEBuffer™ r2.1: 100%
  NEBuffer™ r3.1: 10%
  rCutSmart™ Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 µg/ml Recombinant Albumin
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  否

  甲基化敏感性

  dam 甲基化: 不敏感
  dcm 甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 甲基化与酶切位点重叠阻断酶切

  同裂酶

  Alw44I
  VneI
  

• 注意事项
  1. 哺乳动物基因组 DNA 的 CpG 甲基化与酶切位点重叠阻断酶切。
  2. ApaLI 不能切割 M13 DNA。M13 DNA 中存在一个 ApaLI 识别位点的报道是由于测序错误所致。正确的序列为 GTGCTC，能够被 BsiHKAI 或 Bsp1286I 切割。
  3. 对于不能热失活的酶，我们建议进行柱纯化（如 Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒），或琼脂糖凝胶电泳后切胶回收（建议使用 Monarch 胶回收试剂盒），或酚/氯仿抽提。