莱氏无胆甾支原体PCR检测试剂盒

PCR Detection Kit for Acholeplasma Laidlawii

货号：M-acla-20        规格：20次反应

货号：M-acla-50        规格：50次反应

货号：M-acla-100        规格：100次反应

保存条件：保存于-20℃，避免反复冻融。没有反复冻融的情况下，保质期一年。

莱氏无胆甾支原体（Acholeplasma laidlawii）是一种缺乏细胞壁的革兰氏阳性细菌，属于柔膜菌门（Tenericutes）。其基因组特征鲜明，典型菌株的基因组大小约为1.5-1.6 Mb，GC含量约为32%，编码约1,200-1,500个基因，展现出高度精简的遗传结构。这种基因组精简性与其寄生或共生生活方式相关，许多代谢途径（如氨基酸合成）的基因缺失，依赖宿主提供营养。值得注意的是，其基因组中完全缺失与甾醇合成相关的基因，这与支原体科（Mycoplasmataceae）不同，后者虽不能合成甾醇但需外源摄取，而莱氏无胆甾支原体甚至无需甾醇即可生长，这一独特特性反映在其种名"无胆甾"中。

基因组分析还揭示其具有典型的支原体特征：缺乏三羧酸循环和电子传递链相关基因，能量代谢依赖糖酵解；同时保留了DNA复制、转录和翻译的核心机制。有趣的是，其基因组中频繁出现插入序列（IS元件）和多基因家族（如膜蛋白基因），暗示转座子活动和基因复制在进化中驱动了基因组可塑性。此外，某些菌株携带可移动遗传元件（如原噬菌体区域），可能参与水平基因转移。这些特征共同塑造了莱氏无胆甾支原体的适应性，使其能在植物、昆虫和动物等多种宿主体表生存，成为研究基因组缩减与宿主适应的理想模型之一。

在传统的生物制药操作中，通常使用过滤法除菌，培养基中的莱氏无胆甾支原体是一个严重的问题，它可能污染牛血清，也可能藏匿于无血清细胞培养基产品中。在无血清的细胞培养基中，莱氏无胆甾支原体可能会在冷藏温度或室温下长期存活并繁殖。

莱氏无胆甾支原体的检测方法主要包括培养法、分子生物学技术和免疫学检测。培养法是最传统的方式，利用富含胆固醇和蛋白质的特殊培养基（如PPLO培养基）进行培养，由于该菌生长缓慢且菌落微小（典型的“煎蛋状”菌落），通常需要数天至一周的观察，并结合显微镜检查确认。分子生物学方法，如PCR技术，因其高灵敏度和特异性成为主流检测手段，常用靶标包括16S rRNA基因或特异性膜蛋白基因（如ldh），可快速从样本中检出微量DNA。免疫学方法如ELISA或免疫印迹可用于检测特定抗原或抗体，但交叉反应可能影响准确性。近年来，高通量测序和宏基因组学也逐渐应用于复杂样本中的无胆甾支原体检测，尤其适用于环境或共生微生物组研究。综合应用这些方法可提高检测可靠性，尤其在细胞培养污染监测或临床诊断中具有重要意义。

莱氏无胆甾支原体PCR检测试剂盒采用常规PCR结合凝胶电泳技术，针对16S rRNA基因进行PCR鉴定，引物经BLAST验证为特异性靶向莱氏无胆甾支原体、马无胆甾支原体（Acholeplasma hippikon）、以及粒状无胆甾支原体（Acholeplasma granularum）。使用本试剂盒对13种与细胞培养有关的支原体进行检测，仅莱氏无胆甾支原体产生特异性条带；对98份确定有支原体污染的细胞培养样品进行检测，鉴别出20个被莱氏无胆甾支原体污染的样品。可见本试剂盒可用于细胞培养物中莱氏无胆甾支原体的检测。

本试剂盒仅供科研使用。不可用于临床诊断。