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耳念珠菌PCR试剂盒
包装:50次


产品名称
Candida auris PCR Kit
产品介绍

产品及特点

耳念珠菌( Candida auris )是一种近年来出现的酵母,该菌株可引起侵袭性感染,对氟康唑等抗真菌药物呈现多重耐药性,感染患者具有较高的死亡率。耳念珠菌可引起血流感染、伤口感染和耳炎。本产品是根据 PCR原理开发检测耳念珠菌的试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR50次,但只能用于科研。

规格及成分

成分编号五孔盒包装
PCR  Magic Mix 3.0908051mL(绿盖)
超纯水1009351mL(黄色)
耳念珠菌 PCR引物混合液13-60250yw100μL(白盖)
耳念珠菌 PCR阳性对照(1×107拷贝/μL)pc60250-MZ323988.150μL(黄盖)
使用手册13-60250sc1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品的  DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品,则需要做 N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加10μL PCR阳性对照的 10000倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水,提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分样品管N+2个PCR阴性对照PCR阳性对照
PCR  MagicMix3.0各 20μL20μL20μL
耳念珠菌 PCR引物混合液各 2μL2μL2μL
N+2个样品 DNA模板各 18μL不加不加
PCR阴性对照(水)不加18μL不加
PCR阳性对照(耳念珠菌 PCR阳性对照的 10000倍稀释液)不加不加18μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程温度时间
预变性98℃10min
PCR反应(40个循环)98℃30sec
PCR反应(40个循环)60℃30sec
最后延伸72℃10min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物,进行电泳。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须有预期片段大小条带出现,预期片段

110bp。阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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