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土壤碱性蛋白酶(S-ALPT)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
包装:50管/24样


产品介绍

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤碱性蛋白酶在碱性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。碱性条件下,土壤碱性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝,在680nm有特征吸收峰。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂一液体20ml×1瓶4℃
试剂二粉剂×1瓶4℃
试剂三粉剂×1瓶4℃
试剂四液体40ml×1瓶4℃
试剂五液体10ml×1瓶4℃
标准品液体1ml×1支4℃

溶液的配制:

1.试剂二:临用前加入10ml试剂一,沸水浴搅拌溶解后待用;

2.试剂三:临用前加入10ml蒸馏水充分溶解待用;

3.标准品:20μmol/ml酪氨酸溶液。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、甲苯、研钵、蒸馏水、30-50目筛。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。

二、测定步骤

1.分光光度计预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。

2.标准溶液的稀释:将20μmol/ml酪氨酸标准液用蒸馏水稀释100倍至0.2μmol/ml使用,现用现配。

3.样本测定:

试剂名称测定管对照管标准管空白管
风干土样(g)0.10.1--
试剂一(μL)100100--
试剂二(μL)200
--
混匀后,37℃反应24h,期间振荡5-6次,使土样与反应液充分接触。
试剂三(μL)200200--
试剂二(μL)-200--
混匀,10000rpm室温离心10min,取上清液
上清液(μL)220220--
标准液(μL)--220-
蒸馏水(μL)---220
试剂四(μL)650650650650
试剂五(μL)130130130130
混匀,40℃水浴10min,10000rpm室温离心10min,取上清液于680nm下读取各管吸光值A,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管,计算ΔA测定=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。(标准管、空白管只需测1-2次,每个测定管设一个对照管)

三、土壤碱性蛋白酶活性计算

单位定义:每天每 g土样中产生 1μmol的酪氨酸为一个土壤碱性蛋白酶活力单位。

土壤碱性蛋白酶(U/g土样)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V反总÷W÷T= 0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W

C标准:标准管浓度,0.2μmol/ml;V反总:反应体系总体积,0.5ml;T:反应时间,1d;W:样本质量,g。

注意事项:

当吸光值大于 1时,建议将上清液用蒸馏水稀释后进行测定,计算时注意乘以稀释倍数。

实验实例:

1.分别取 0.1g三叶草土于 1.5mlEP管中,分别为对照管及测定管,按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.320-0.232=0.088,ΔA标准=A标准-A空白=0.540-0.028=0.512,按土壤质量计算酶活得:土壤碱性蛋白酶(U/g土样)=0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.1×0.088÷0.512÷0.1=0.1718 U/g土样。

2.分别取 0.1g森林 3号土样于 1.5mlEP管中,分别为对照管及测定管,按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.553-0.460=0.093,ΔA标准=A标准-A空白=0.540-0.028=0.512,按土壤质量计算酶活得:土壤碱性蛋白酶(U/g土样)=0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.1×0.093÷0.512÷0.1=0.1816 U/g土样。

相关发表文献:

[1] Manyun Zhang,Jun Wang, Shahla Hosseini Bai,et al. Evaluating  the effects of pHytoremediation with biochar additions  on soil nitrogen mineralization  enzymes  and fungi. Environmental  Science and Pollution  Research.  May 2018;(IF2.914)

[2] Zhang M,  Wang W, Wang J,  et  al.  Dynamics of biochemical  properties  associated  with  soil nitrogen mineralization  following nitrification  inhibitor  and fungicide applications[J].  Environmental  Science and Pollution Research, 2017, 24(12): 11340-11348.

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