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土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
包装:50管/48样


产品介绍

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围,分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

碱性环境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂一液体21ml×1瓶4℃
试剂二粉剂×1瓶4℃
试剂三液体5ml×1瓶4℃
试剂四粉剂×1支4℃
标准品液体1ml×1支4℃

溶液的配制:

1.试剂二:临用前加50ml蒸馏水充分溶解。

2.试剂四:临用前加1152μL无水乙醇(自备),48μL蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)

3.标准品:0.5μmol/ml苯酚标准液。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、研钵、蒸馏水、乙醇和甲苯(不允许快递)。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取风干混匀土壤约0.1g,加入0.05ml甲苯(自备),轻摇15min;加0.4ml试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1ml试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。10000rpm室温离心10min,取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤

1.分光光度计预热30min以上,调节波长到660nm,蒸馏水调零。

2.空白管:取1ml玻璃比色皿,加入50μL试剂一,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm测定吸光度,记为A空白管。

3.标准管:取1ml玻璃比色皿,加入50μL标准液,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm测定吸光度,记为A标准管。(空白管和标准管只需要测定1-2次)

4.测定管:取1ml玻璃比色皿,加入50μL上清液,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm测定吸光度,记为A测定管。

三、S-AKP/ALP活性计算

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol酚为 1个酶活单位。

S-AKP/ALP(U/g土样)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W÷T×1000=725×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准液:0.5μmol/ml;V总:催化体系总体积,1.45ml;W:土壤样本质量,g;T:催化反应时间,24h=1d;1000:单位换算系数,1μmol=1000nmol。

相关发表文献:

[1] Liu B, Wang S, Wang J, et al. The great potential for pHytoremediation  of abandoned tailings  pond using ectomycorrhizal Pinus sylvestris[J]. Science of The Total Environment, 2020, 719: 137475.

[2] Shao T, Zhao J J, Liu A, et al. Effects of soil pHysicochemical properties on microbial communities in different ecological niches in coastal area[J]. Applied Soil Ecology, 2020: 103486.

参考文献:

[1]关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京:科学出版社,1982

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