土壤β-葡萄糖苷酶(S-β-GC)活性检测试剂盒(微量法)
产品介绍
S-β-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。 S-β-GC能够催化对-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,产物略显黄色,在400nm有特征光吸收。 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 产品组成:
溶液的配制: 1.试剂一:自备甲苯; 2.试剂二:临用前每瓶加入13ml蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存; 3.标准液:5mmol/L的对硝基苯酚溶液; 4.标准液的准备:取100μL标准液,加入到400μL试剂三中,得到1mmol/L标准液,再用蒸馏水十倍稀释到100μmol/L。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温培养箱、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、冰、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。 操作步骤: 一、样品处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。 二、测定步骤 1.分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。 2.用蒸馏水倍比稀释:50、25、12.5、6.25μmol/L。100、50、25、12.5、6.25μmol/L做标准液。 3.加样表:
充分混匀,室温静置2min后,测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。(每个测定管设一个对照管)。 三、S-β-GC酶活的计算 1.标准曲线建立: 根据标准管的浓度(y)和吸光度ΔA=A标准管-A空白管(x),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA(x)带入公式计算样本浓度(μmol/L)。 2.S-β-GC酶活的计算: 单位的定义:每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-β-GC酶活(U/g土样)=y×V反总÷W÷T=0.36×y T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:3×10-4L;W:样本质量,0.02g。 |
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