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纤维素含量(CLL)测试盒(可见分光光度法)
货号:CLL-2-Y
包装:50管/48样


产品介绍

正式测定前取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖,通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起,是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维,是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖。

测定原理:

纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下,可脱水生成β-糠醛类化合物。β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 60ml × 1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体 6ml × 1支,4℃保存。

样品的前处理:

1、样品 80℃烘干至恒重【注 1】,粉碎,过 40目筛。称取 0.01g样本,加入 1ml 80%乙醇,90℃水浴 20min【注 2】,冷却至室温,8000g 25℃离心 10min,弃上清。沉淀中加入 1.5ml  80%乙醇和丙酮各清洗一遍(涡旋振荡 2min左右,8000g 25℃离心 10min,弃上清),沉淀烘干后即为粗细胞壁。

2、在上述粗细胞壁中加入 1ml试剂一,充分混匀,90℃水浴 30min【注 2】。取出冷却后 8000g25℃离心 10min,弃上清。沉淀中加入 1ml蒸馏水混匀,涡旋振荡 2min左右,8000g 25℃离心 10min,弃上清,沉淀用蒸馏水重复清洗 3次(加入 1ml蒸馏水混匀,涡旋振荡 2min左右,8000g 25℃离心 10min,弃上清)。沉淀中加入 1ml丙酮,混匀后 8000g 25℃离心 10min,弃上清,沉淀烘干待用。

3.在上述烘干的沉淀中加入 0.5ml蒸馏水,置于冰水浴中,缓慢加入 0.75ml浓硫酸,混匀,冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min,取上清液,用蒸馏水稀释 20倍后待测【注 3】

注意事项:

【注 1】 80℃烘干的时间为 2小时,依据样本情况可延长烘干时间。

【注 2】 90℃加热过程中 EP管可能爆开,建议用胶带封口或使用带螺旋盖的防爆 EP管。

【注 3】部分样本中纤维素含量较低(淀粉含量较高),如米粉、板栗、甘薯等,可不稀释或减小稀释倍数。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。

2、调节水浴锅至 95度。

3、工作液的配制:在试剂二中加入 4ml试剂三,充分溶解,如较难溶解,可加热搅拌;用不完的试剂 4℃保存一周;

4、加样表(在 EP管中反应):

试剂(μL)空白管测定管
样本
300
蒸馏水300
工作液7070
浓硫酸630630

混匀,置 95度水浴中 10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温后,于 620nm处,分别读取空白管和测定管吸光值,ΔA=A测定管-A空白管。

注意:

1、空白管只要做一管。

2、由于浓硫酸具有强腐蚀性,请谨慎操作。

纤维素含量计算:

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 7.875x - 0.0043;x为标准品浓度(mg/ml  ),y为吸光值。

2、按样本质量计算:

纤维素(mg/g干重)= [(ΔA+0.0043)÷7.875×V1]÷(W×V1÷V2)×20=3.17×(ΔA+0.0043)÷W。

V1:加入样本体积,0.3ml  ;V2:加入提取液体积,1.25ml  ;W:样本干重, 0.01g;20:样本稀释倍数。

注意:最低检测限为 1mg/g 干重或 10μg/ mg prot

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