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硫代葡萄糖苷含量测试盒(可见分光光度法)
货号:SPT-2-W
包装:50管/24样


产品介绍

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

硫代葡萄糖苷(Glucosinolates),简称硫苷,是十字花科蔬菜中的一种重要的次生代谢产物,根据侧链基团的不同,可以把硫苷分为脂肪族、芳香族和吲哚族三大类。

测定原理

硫葡糖苷酶催化硫代葡萄糖苷反应产生葡萄糖。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存,临用前加入 1.5mL试剂二溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存;

试剂二:液体 5mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体 20mL×1瓶,4℃避光保存;试剂四:液体 20mL×1瓶,4℃避光保存。

样本处理

样本烘干粉碎,过 100目筛。称 0.1g样本,加入 1mL蒸馏水,100℃水浴提取 60min。冷却至室温,10000g 4℃离心 10min,取上清待测。

测定操作

在 EP管中加入如下试剂


对照管测定管
样品(μL)250250
试剂一(μL)
50
试剂二(μL)50
充分混匀,37℃反应 120min
试剂三(μL)350350
试剂四(μL)350350
充分混匀,37℃反应 30min,吸取反应液至 1mL玻璃比色皿,测定 505nm处吸光值,记为 A对照和 A测定,△A=A测定-A对照。

计算公式

标准曲线:y = 1.869x + 0.0043,R2 = 0.9999;x为标准品浓度:μmol/mL;y为吸光度△A。

硫代葡萄糖苷含量(μmol/g鲜重)=(△A -0.0043)÷ 0.9345×V样÷(V样÷V样总×W )=0.535×(△A -0.0043)÷ W

V样,加入样本上清体积,0.250mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g。

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