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类黄酮糖基转移酶(UFGT)测试盒(微量法)
货号:UFGT-1-W
包装:100管/96样


产品介绍

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素,属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中,使其呈现由红到紫等不同颜色,是植物主要的呈色物质。类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT)是花色苷合成过程的最后一个酶,可以把不稳定的花色素催化成花色苷,在一定范围内,UFGT活性与花色素苷的合成呈现正相关。

测定原理:

UFGT催化 UDPG与槲皮素生成 UDP;UDP在丙酮酸激酶与乳酸脱氢酶作用下,氧化 NADH为 NAD+,NAD+生成速度与 UDP含量成正比,通过 340nm吸光度下降速度反映 UFGT活性。

需自备的仪器和用品:

酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃避光保存;临用前加入 20mL试剂四溶解。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;

试剂三:液体 100μL×1管,4℃避光保存;

试剂四:液体 50mL×1瓶,4℃保存;

样品测定的准备:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL提取液),冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、在 EP管中加入如下试剂

试剂名称(μL)测定管
样本20
试剂一180

混匀,30℃反应 4h,95℃水浴 5min灭活,冷却至室温。10000g 4℃离心 5min,取反应液待测。

2、工作液配制:在试剂二中加入 20mL试剂四溶解,再加入 20μL试剂三,混匀待用。用不完的工作液分装后-20℃保存一个月,禁止反复冻融。

3、在 96孔板中加入如下试剂

反应液20
工作液180

混匀,测定 340nm下 1min时吸光值 A1与 6min时吸光值 A2,ΔA=A1-A2。

UFGT活力计算:

1、按照蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg组织蛋白每分钟催化 1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

UFGT活力(nmol/min/mg prot)=ΔA×V反总÷(ε×d)×109÷(V样×Cpr)÷T×10=134×ΔA÷Cpr

2、按样本鲜重计算

单位的定义:每 g组织每分钟催化 1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

UFGT活力(nmol/min/g鲜重)=ΔA×V反总÷(ε×d)×109÷(W× V样÷V样总)÷T×10=134×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L/ mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,240 min;10,稀释倍数;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;

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