正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

直链淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷键连接的多糖链，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。

测定原理：

利用 80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，直链淀粉与碘形成的络合物在 620nm 下有吸收峰。

需自备的仪器和用品：

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 100mL×1 瓶；4℃保存；

试剂二：乙醚 100mL×1 瓶；(自备)

试剂三：液体 100mL×1 瓶；4℃保存；

试剂四：液体 2mL×1 瓶；4℃保存；

试剂五：液体 300uL×1 瓶；4℃保存；

淀粉提取：

称取 0.01～0.02g 烘干样本(建议称取约 0.01g)于研钵中研碎，加入 1mL 试剂一，充分匀浆后转移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃离心 5min，弃上清，留沉淀，加入1mL 试剂二(乙醚)振荡 5min，3000g，25℃离心 5min，弃上清，留沉淀，加入 1mL 试剂三充分溶解，90℃水浴 10min，冷却后待测。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。

测定管：在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20μL 样本， 14μL 试剂四，120μL 蒸馏水，2μL 试剂五，44uL 蒸馏水，混匀，测定 620nm 处吸光值，记为 A 测定。

空白管：在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20μL 试剂三， 14μL 试剂四，120μL 蒸馏水，2μL 试剂五，44μL 蒸馏水，混匀，测定 620nm 处吸光值，记为 A 空白。

直链淀粉含量计算：

标准条件下测定的回归方程为 y=1.755x+0.0062；x 为标准品浓度(mg/mL)，y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

直链淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 测定-A 空白-0.0062)×V1]÷1.755÷(V1×Cpr)=0.57×(A 测定-A 空白-0.0062)÷Cpr

2、按样本干重计算

直链淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 测定-A 空白-0.0062)×V1]÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A 测定-A 空白-0.0062)÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

标准条件下测定的回归方程为 y= 0.8775x+0.0062；x 为标准品浓度(mg/mL)，y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

直链淀粉含量(mg/mg  prot)=[(A 测定-A 空白-0.0062)×V1]÷0.8775  ÷(V1×Cpr)=1.14×(A 测定-A 空白-0.0062)÷Cpr

2、按样本干重计算

直链淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 测定-A 空白-0.0062)×V1]÷0.8775÷(W×V1÷V2) =1.14×(A 测定-A 空白-0.0062)÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

最低检测限为 1mg/g 干重或 10μg/mgprot。