限制性内切酶EcoP15I

• 本产品随附一管 10X ATP 溶液（10 mM 浓度，NEB #B6101S，不单独销售）
• 符合省时酶（Time-Saver™）标准，可在 5-15 分钟内完成酶切

• 酶切需要两个或两个以上识别位点。请查看下表中的酶列表和使用建议以及背景信息文章。

• 限制性内切酶酶切位点：CAGCAG(25/27)

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自 pSHl180（D.N. Rao）质粒的 EcoP15 l res-mod 基因

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50µl 的总反应体系中，37℃ 下，1 小时内酶切 1 µg pUC19 DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X NEBuffer™ r3.1
  Supplement with 1X ATP
  Incubate at 37℃

  1X NEBuffer™ r3.1
  100 mM NaCl
  50 mM Tris-HCl
  10 mM MgCl₂
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ r1.1: 75%
  NEBuffer™ r2.1: 100%
  NEBuffer™ r3.1: 100%
  rCutSmart™ Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  100 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 µg/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  65℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam 甲基化: 不敏感
  dcm 甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

• 注意事项
  1. DNA 切割需要 ATP。有效切割需要有两个相反方向的识别位点。以头对头方向**。序列的“头”是指 dG 位于 CAGCAG 链（上链）的 3´ 末端时。切割效率还受两个识别位点之间距离的影响。
  2. EcoP15I 酶切需要两个识别位点，在具有单个识别位点的质粒上酶切受限。
  3. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  4. 酶切需要两个或两个以上识别位点。请查看下表中的酶列表和使用建议以及背景信息文章。
  5. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。

• 参考文献
  1. Elisabeth Möncke-Buchner, Maja Rothenberg, Stefanie Reich, Katja Wagenführ, Hideo Matsumura, Ryohei Terauchi, Detlev H. Krüger, and Monika Reuter (2009). Functional Characterization and Modulation of the DNA Cleavage Efficiency of Type III Restriction Endonuclease EcoP15I in Its Interaction with Two Sites in the DNA Target. J. Mol. Biol. 387, 1309–1319.