限制性内切酶HgaI

• IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割。
• 限制性内切酶酶切位点：GACGC(5/10)

产品来源

大肠杆菌菌株，携带来自鸡嗜血杆菌（Haemophilus gallinarum）（ATCC 14385）的 HgaI 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内酶切 1 µg ΦX174 DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X NEBuffer™ r1.1
  Incubate at 37℃

  1X NEBuffer™ r1.1
  10 mM Bis-Tris-Propane-HCl
  10 mM MgCl₂
  100 µg/ml 重组白蛋白
  (pH 7 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ r1.1: 100%
  NEBuffer™ r2.1: 100%
  NEBuffer™ r3.1: 25%
  rCutSmart™ Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  50% Glycerol
  200 µg/ml BSA
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  65℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam 甲基化: 不敏感
  dcm 甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 阻断酶切

  同裂酶

  CseI
  

• 注意事项
  1. 在已知的 3,000 多种限制性内切酶中，只有少数几种酶能够产生超过 4 个碱基的突出末端，HgaI 就是其中一种。
  2. 建议消化每 µg DNA，HgaI 的用量不 > 5 个单位。
  3. HgaI 在没有底物的情况下会失去活性，37℃ 条件下，1 小时后基本无活性。
  4. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  5. CpG 甲基化阻断酶切。
  6. 延时酶切、高酶浓度或甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性