产品说明
一般描述
Sma I 识别序列 *C℃*C↓GGG，并生成具有平末端的片段。
特异性
识别位点：*C ℃*CGGG
*C ℃*CGGG
限制性位点：*C ℃*C↓GGG
*C ℃*C↓GGG
热灭活：Sma I 可通过在 65℃ 孵育 15 分钟进行热灭活(最多 100 U/μg DNA)。
应用
Sma I 已用于限制性分析。在快速脉冲场凝胶电泳(PFGE)，限制性酶切消化过程中，它也被用于限制性酶混合物中。
质量
缺乏非特异性内切核酸酶活性
将 1μg λDNA 与过量的 Sma I 一起在 50μl SuRE/Cut 缓冲液 A 中孵育 16 小时。分析证书提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。
缺乏核酸外切酶活性
将约 5μg [3H] 标记的小牛胸腺 DNA 与 3μl Sma I 一起溶于 100μl 50mM Tris-HCl 溶液(含 10mM MgCl2、1mM 二硫赤藓糖醇，pH 约 7.5)中，并在 +37℃ 下孵育 4 小时。根据分析证书所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。
DNA图谱分析
不同DNA上的切割位点数
- λ: 3
- φX174: 0
- Ad2: 12
- M13mp7: 0
- pBR322: 0
- pBR328: 0
- pUC18: 1
- SV40: 0
单位定义
在总体积为 25 μl (1x)的(1x)SuRE/Cut 缓冲液 A 中，一个单位为在 +25 ℃、1 小时内完全切割 μg λDNA 所需的酶活性。
分析说明
在 PCR 缓冲液中的活性：100%
在 PCR 混合液(Taq DNA 聚合酶缓冲液)中的相对活性为 100%。PCR 混合物含有 λDNA、引物、10 mM Tris-HCl (pH 8.3，20℃)、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200μM dNTPs,2.5 UTaq DNA 聚合酶。混合物将进行 25 次扩增循环。Pwo SuperYield DNA 聚合酶 PCR 混合物反应缓冲液中的活性为 100%。如果添加富含 GC 的溶液，则其活性保持在 100%。Pwo SuperYield DNA 聚合酶 PCR 混合物不在美国销售。
SuRE/Cut 缓冲液体系
建议使用粗体印刷的缓冲液以获得最佳活性
- A：100%
- B：0-10%
- H：0-10%
- L：0-10%
- M：0-10%
相容末端
Sma I 生成的末端与任何平端兼容。
同裂酶
该酶是 Cfr9 I、PspA I、Xma I 和 XmaC I 的同分异构体。
甲基化敏感性
Sma I 在识别序列的三个 C 残基(°)的中间不受 5-甲基胞嘧啶的抑制。但是，其活性任何其他 C 残基(*)处受到 5-甲基胞嘧啶的抑制，或在识别序列(*C℃*C↓GGG)中任何位置受 4-甲基胞嘧啶的抑制。
孵育温度
+25℃
经PFGE测试
Sma I 已经过脉冲场凝胶电泳(在细菌染色体上)测试。对包埋在 PFGE 分析用琼脂糖中的基因组 DNA(大肠杆菌 C 600)进行切割时，我们建议每 μg DNA 使用 10 U 酶，孵育时间为 4 小时。
连接和重切割测定
将通过完全消化 1 μg λDNA 获得的 Sma I 片段与 10 μl 的 1U T4 DNA 连接酶连接，连接方法是在 66 mM Tris-HCl 溶液(含 5 mM MgCl2、5 mM 二硫赤藓糖醇、1 mM ATP，+20℃，pH 7.5)中在 +25℃ 下孵育 16 小时，得到 1μg λDNA 片段回收率高于 80%。
随后用 Sma I 重新酶切，得到高于 80% 的典型 λDNA × Sma I 片段。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
产品性质
| 质量水平 | 100 |
| 形式 | solution |
| 包装 | pkg of 1,000 U (10220566001 [10 U/μl]) pkg of 5,000 U (10656348001 [10 U/μl]) pkg of 5,000 U (11047639001 [40 U/μl]) |
| manufacturer/tradename | Roche |
| 参数 | 25 ℃ optimum reaction temp. |
| technique(s) | electrophoresis: suitable |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
| 货号 | 组份 |
| Enzyme Solution | |
| SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated |
安全信息
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 1 |
| 闪点(F) | does not flash |
| 闪点(C) | does not flash |
