产品说明
一般描述
Pwo DNA 聚合酶是一种高度进行性耐热 5′-3′DNA 聚合酶并拥有一个 3′–5′核酸外切酶活性，又称校对活性。该酶无可检出的 5′–3′核酸外切酶活性。与 Taq DNA 聚合酶在此温度下半衰期小于 5 min 相比，Pwo DNA 聚合酶在 + 100℃ 下具有更高的热稳定性，半衰期超过 2 小时。Pwo DNA 聚合酶产生的 PCR 产物是平端的，因此可以直接用于平端连接，无需对末端进行任何预处理。
应用
- 由于其校对活性，耐热的 Pwo DNA 聚合酶的错误率极低，与 Taq DNA 聚合酶相比低 18 倍。因此它是 DNA 合成中需要最高可能保真度的应用的理想选择。可用于高保真 PCR
- PCR 产物的克隆
- 罕见突变的表征
- PCR
特点和优势
- 准确度极佳(比 Taq DNA 聚合酶准确 18 倍)
- 高热稳定性
- 与 Taq DNA 聚合酶几乎同样的进程
- 接受修饰的核苷酸
包装
1 个试剂盒包含 4 种组份
质量
测定每批 Pwo DNA 聚合酶：
- 活性 ：在活化 DNA 上检测酶。
- 功能 ：酶分两次 PCR 检测，使用 λ以 DNA 和人类基因组 DNA 为模板。
- 校对能力 ：校对活动根据 laq Iq 保真度测试 [Frey,B. & Suppmann,B. (1995) 生物化学 2. 8-9]测试。
- 不存在核酸酶： 该酶在各种底物上进行检测，以确保根据当前的质量控制程序不存在可检测的核酸内切酶、核酸外切酶和切口活性。
单位定义
一个单位 Pwo DNA 聚合酶定义为在 + 70℃ 和下述条件下 30 min 内催化 10 nmol 总脱氧核苷三磷酸掺入酸可沉淀 DNA 的酶量。
单位分析： 活化 DNA 分析用孵育缓冲液
20 mM Tris-HCl，pH 8.8 (20℃)，50 mM KCl，2.5 mM MgCl 2 ，10 mM 2-巯基乙醇，0.2 mM 各 dATP，dCTP，dGTP，dTTP。
孵育程序
12.5 mg 活化小牛胸腺 DNA 和 0.1 mCi [α- 32 P] dCTP 与 0.01～0.1 UPwo DNA 聚合酶在 50μl 含石蜡油的孵育缓冲液，+ 70℃，30 min。通过三氯乙酸沉淀，然后闪烁计数，测定掺入的 dNTP 的量。
体积活度：5 U/μl
制备说明
Pwo DNA 聚合酶最初是从超嗜热的古细菌——沃氏火球杆菌中分离得到的。
修饰核苷酸是底物
Pwo DNA 聚合酶接受修饰核苷酸，如地高辛-dUTP、生物素-dUTP 或荧光素-dUTP。因此，它可以在 PCR 过程中将这些核苷酸添加到 DNA 中。这些非放射性标记的产物可在许多应用中用作杂交探针。
镁浓度
如果使用随酶提供的含镁反应缓冲液，PCR 中的最终 MgCl2 浓度将为 2.0 mM。对于其他镁浓度(例如，为优化反应以适应特定模板)，使用无镁反应缓冲液并加入适量镁贮备液。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
法律信息
本产品的使用受到美国专利要求及其对应的境外同等专利的保护。购买本产品，即相当于依照境外的专利声明获得了一份受限制、不可转让的使用许可，即将此等数量的产品用于购买者′内部的研究用途。未通过明示、暗示或禁止反言形式授予购买者任何专利主张下的权利、执行任何专利方法的权利或开展任何形式的商业服务的权利，包括但不限于出于经济利益或其他商业考虑报告购买者′的活动结果。本品仅供研究使用。如需用于Roche专利许可的诊断用途，需另外征得Roche许可。有关购买许可的更多信息，可联系Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA获取。</ br>买方须知：有限授权<br />本产品的使用受到美国专利No. 6,127,155 及其对应的境外专利声明保护。 购买本产品，即相当于依照境外的专利声明获得了一份受限制、不可转让的使用许可，即将此等数量的产品用于购买者′内部的研究用途。 购买者无权使用任何其他专利权利要求，无权进行任何形式的商业服务，包括但不限于以收费或其他商业考虑的形式对购买者′的活动结果进行报道，该产品没有明示或暗示地以禁止反言或其他任何方式,授予过任何知识产权许可。 本品仅供研究使用。如需用于Roche专利声明的人类和兽医诊断用途，需另外征得Roche许可。 Roche专利权利声明下的内部研究以及人类和兽医诊断用途以外的所有用途均需要Thermo Fisher Scientific的单独许可。关于从Roche购买许可证的更多信息可以通过联系Roche Molecular Systems，Inc.，4300 Hacienda Drive，Pleasanton，California 94588，USA或Roche Diagnostics GmbH，Sandhofer Strasse 116,68305 Mannheim，Germany以获得许可证。 有关从Thermo Fisher Scientific购买许可证的更多信息，请联系Thermo Fisher Scientific的许可部门 ，5791 Van Allen Way，Carlsbad，California 92008，USA。
基本信息
| 酶学委员会(EC)编号 | 2.7.7.7 ( BRENDA | IUBMB ) |
产品性质
| 用途 | sufficient for ≤200 reactions (11644955001) sufficient for 200 reactions sufficient for ≤40 reactions (11644947001) sufficient for 40 reactions |
| 质量水平 | 100 |
| 特点 | High Fidelity PCR dNTPs included: no hotstart: no |
| 包装 | pkg of 100 U (11644947001) pkg of 500 U (11644955001 [2 x 250 U]) |
| manufacturer/tradename | Roche |
| technique(s) | PCR: suitable |
| input | purified DNA |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
| 货号 | 组份 |
| Enzyme is supplied in storage and dilution buffer | |
| PCR buffer, with 20 mM MgSO4 10x concentrated | |
| PCR buffer, without MgSO4 10x concentrated | |
| MgSO4 stock solution |
安全信息
| 危险声明 | H412 |
| 预防措施声明 | P273 - P501 |
| 危险分类 | Aquatic Chronic 3 |
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 2 |
| 闪点(F) | does not flash |
| 闪点(C) | does not flash |
