产品说明
一般描述
KAPA2G 快速基因分型混合物(2X)是一种即用型主混合物，包括除引物和模板之外快速聚合酶链式反应所需的其他所有成分。ReadyMix™混合物还包含两种惰性染料，可以实现通过琼脂糖凝胶电泳分析PCR反应产物，而无需添加DNA上样溶液。KAPA Express Extract 系统包含一种设计用于快速样品降解的热稳定蛋白酶。KAPA Express Extract(一种新型热稳定蛋白酶和缓冲系统)能够在短短15分钟内从小鼠组织中提取出可立即用于PCR的DNA，带染料的 KAPA2G快速基因分型混合物含有的DNA聚合酶通过定向进化技术改造而具有高持续性和超高速。KAPA Express Extract和KAPA2G快速基因分型混合物的组合可在低至1小时内从小鼠组织中可靠地提取和扩增DNA片段，而传统方案则需要超过1天的时间。
应用
KAPA2G 快速基因分型混合物：
- 已被用于从小鼠尾巴、耳朵和脚趾组织中提取和扩增DNA
- 已被用于从其他动物组织和杂交瘤中提取和扩增DNA
- 适用于聚合酶链式反应(PCR)
生化/生理作用
以KAPA Express Extract提取的DNA使用KAPA2G 快速基因分型混合物和染料进行扩增。KAPA2G 快速基因分型混合物产生的DNA片段进行dA-tailed处理，并可克隆进TA克隆载体，或用于常规下游分析或应用，包括限制酶消化、克隆和测序。和野生型Taq一样，KAPA2G Fast 具有 5'→3'聚合酶和 5'→3'核酸外切酶活性，但是没有3'→5'核酸外切酶(校正)活性。KAPA2G Fast 具有类似于野生型 Taq的保真度；它的错误率为大约每结合1.7 x 105个核苷酸出现1次错误。裂解在热循环仪、加热器或水浴中进行，然后将样品离心，以回收含DNA的上清液。然后将上清液稀释10倍，再将其用作PCR模板。和依赖蛋白酶K消化的现有方案不同，采用KAPA Express Extract试剂盒可以在单个试管中方便地进行萃取，无需使用危险的化学物质或多个洗涤步骤。这一点显著降低了样本丢失或污染的风险。该过程可以产生充足的模板用于多种测定，并且易于放大，用于处理 96 孔板中的样品。每次萃取都能得到充足的模板，可用于至少100次基因分型PCR反应。萃取物(稀释的或未稀释的)在-15至-25℃下可稳定保存至少6个月。
特点和优势
提高生产能力、周转时间和可靠性：
- PCR-ready DNA 只需 15 分钟即可生成
- 最低限度的处理，从而降低样本丢失或污染的风险
- 有充足模板用于多种测定；易于缩放，以处理 96 孔格式的样本
- 快速可靠地扩增各种扩增子长度和 GC 含量各异的 DNA 片段
优于粗提取方法和商业试剂盒：
- 周转时间增加
- 特异性增加
- 成本降低
快速注释：
- 可以在短短 15 分钟内从小鼠尾巴、耳朵或脚趾组织中提取 PCR-ready DNA。PCR 前在 10 mM Tris-HCl (pH 8.0-8.5) 中稀释 DNA 提取物 10 倍，用 1 μL DNA/25 μL 反应。
- 提取液在 -20℃ 下可稳定储存 >6 个月。
- KAPA2G 快速(热启动) 基因分型混合物包含用于快速 PCR 的工程化 KAPA2G 快速 DNA 聚合酶，以及缓冲液、MgCl2 (1.5 mM，1X) 和 dNTP (每种 0.2 mM，1X)。
- KAPA2G 快速基因分型混合物中包含电泳上样染料，可将 PCR 产物直接上样到琼脂糖凝胶上进行分析。
- 对于 <1 kb 的扩增子，使用 15 s 退火时间，15 s 延伸时间，对于更长的扩增子，使用 15-30 s/kb 延伸时间。
质量
KAPA 小鼠基因分型试剂盒包含的所有组分都经过严格的质量控制测试，无污染的核酸外切酶和核酸内切酶活性，并且符合严格的 DNA 污染要求。
制备说明
在每次使用前，应确保产品已完全解冻并充分混合。短期使用时，可将试剂保存 4℃ 条件下(最长 1 个月)。长期储存时，应将试剂放回 -20℃ 环境中。如果所有成分都经过小心处理且未被污染，试剂盒在室温下放置短时间(最长 3 天)预计不会受到损害。
其他说明
仅供研究使用。不可用于诊断过程。
法律信息
ReadyMix is a trademark of sigma-aldrich Co. LLC
基本信息
| NACRES | NA.54 |
产品性质
| 质量水平 | 100 |
| 用途 | sufficient for 500 reactions 25 μL sufficient for 500 reactions |
| 保质期 | ≤18 mo. |
| 特点 | dNTPs included hotstart: no |
| manufacturer/tradename | Roche |
| 浓度 | 2 × |
| technique(s) | PCR: suitable genotyping: suitable |
| input | crude DNA |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
| 货号 | 组份 |
| KAPA2G Fast DNA Polymerase | |
| KAPA2G Buffer A | |
| dNTPs 0.2 mM each at 1X | |
| MgCl2 1.5 mM at 1X | |
| stabilizers | |
| dye |
安全信息
| 象形图 |  |
| 警示用语： | Warning |
| 危险声明 | H371 |
| 预防措施声明 | P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501 |
| 危险分类 | STOT SE 2 |
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 1 |
| 闪点(F) | does not flash |
| 闪点(C) | does not flash |
