产品说明

一般描述

从游离 FFPE 组织切片中分离低至中等通量的微量总 RNA。

应用

高纯 FFPE RNA Micro 试剂盒从福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 的组织样本中分离出总 RNA，直接用于：

• 定性 RT-PCR
• mRNA 的相对定量与实时 PCR 系统，如 LightCycler ^® 480 系统
• 差异显示 RT-PCR
• cDNA 合成
• 引物延伸

特点和优势

在离液盐(盐酸胍)存在下，核酸结合到玻璃纤维织物的表面。这使得高纯度过滤器管能够在核酸(DNA 和 RNA)清除污染物的同时特异性地固定它们。对于 RNA 分离，可以优化结合条件以确保固定所有的 RNA。

大小分布 ：从福尔马林固定的组织中分离得到的 RNA 典型大小为 150～1500 个碱基。然而，切片厚度、组织类型、样本年龄和使用的固定方案会影响分离 RNA 的产量和质量。
容量 ：高纯度的微量过滤管可容纳 500μl 样品体积。
样品材料 ：1-10μm 福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 的组织切片(例如，来自哺乳动物物种的结肠、乳腺、肝脏、肾脏、脾脏)。
高纯 FFPE RNA Micro 试剂盒从福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 的组织样本中分离总 RNA，直接用于 RT-PCR。

• 简化 FFPE 组织中的 RNA 分离 (甚至是小的 RNA 片段)。
• 获得高浓度、即用型洗脱液 和极佳的 RNA 回收率 ( 80%)。
• 分离无 DNA RNA ，用于定性和定量 RT-PCR。
• 用一个试剂盒去除污染物将核糖核酸损失降至最低，无需沉淀或其他降解核糖核酸的处理步骤。
• 生成高质量模板 RNA，在 RT-PCR 中表现出优异的性能和线性。

组分

• 组织裂解缓冲液
• 蛋白酶 K，重组，PCR 级
• 结合缓冲液
• 洗涤缓冲液 I
• 洗涤缓冲液 II
• DNase I，重组，冻干
• DNase 孵育缓冲液
• 洗脱缓冲液
• 高纯微量过滤管
• 收集管

质量

将福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片通过过夜蛋白酶 K 消化进行匀浆，并按照描述进行纯化。通过测量 260 nm 处的光密度确定 RNA 产量。
一步法 RT-PCR 使用 β2M 基因的 RNA 洗脱液和特异性引物。在 LightCycler ^® 2.0 仪器上的以下 PCR 中(使用 LightCycler ^® RNA Amplification Kit SYBR Green I 和针对 β2M)，在 Cp 值小于 24 时获得预期扩增信号。
在无逆转录酶步骤的 LightCycler ^® 2.0 仪器上通过 PCR 检查是否存在污染性基因组 DNA；未获得扩增产物。

制备说明

要制备 RNA 分离的组织切片，必须去除样本中的固定试剂；脱蜡后的切片即可用 High Pure FFPE RNA Micro Kit 进行处理。在用蛋白酶 K 和离液盐(盐酸胍)孵育期间，破坏并均质化脱蜡组织样本。然后将匀浆应用于高纯微量过滤管中的玻璃纤维羊毛上。

在程序中使用的缓冲条件下，所有核酸均与玻璃纤维羊毛特异性结合，而污染物质(盐、蛋白质和其他组织污染物)则不会。用 DNase I 直接在过滤器上消化制备液中的 DNA。简单的洗涤和离心步骤可轻易去除消化的 DNA 片段和其他污染物质。剩余的纯化 RNA 然后在小体积的低盐缓冲液中洗脱。

分析说明

典型 RNA 回收率

起始物料及用量： 1-10μm FFPE 切片，哺乳动物种属的结肠、乳腺、肝脏、肾脏、脾脏
收率/回收率：1.5-3.5 μg/5 μm 切片
所需时间： 60 min，未孵育 3 小时
反应数量： 50/1-10μm 切片

其他说明

高纯技术和二氧化硅吸附试剂盒
用于常规实验室用途。

法律信息

LightCycler is a registered trademark of Roche

产品性质

安全信息

象形图
警示用语：	Danger
危险声明	H302 + H312 + H332 - H314 - H317 - H334 - H335 - H412
预防措施声明	P260 - P280 - P303 + P361 + P353 - P304 + P340 + P310 - P305 + P351 + P338 + P310 - P342 + P311
危险分类	Acute Tox. 4 Dermal - Acute Tox. 4 Inhalation - Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Resp. Sens. 1 - Skin Corr. 1B - Skin Sens. 1 - STOT SE 3
靶器官	Respiratory system
补充剂危害	EUH032
储存分类代码	13 - Non Combustible Solids
WGK	WGK 2
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash