产品说明

一般描述

使用随机寡核苷酸作为引物，用修饰的脱氧核苷三磷酸对 DNA 进行放射性和非放射性标记的便捷试剂盒。该方法通过 Klenow 聚合酶用 3′-作为引物的随机寡核苷酸的 OH 末端。
样品材料

• 线性或超螺旋质粒 DNA，λ脱氧核糖核酸
• 200 bp 较短片段
• 熔融琼脂糖中的 DNA 片段
• 10 ng DNA

检测时间 ：标准标记检测 20 min

注 ：待标记 DNA 的长度不影响反应。孵育 30-60 min 后达到最大掺入。

特异性

标准品试验通常得到的比活度为 2 x 10 ⁹ dpm/μg，孵育 10 min 后使用不同的底物 DNA。
热灭活：通过加入2μl 0.2MEDTA (pH 8.0) 和/或加热至 65℃ 10 分钟来停止反应。

应用

根据高引物(High Prime)原理，高引物DNA标记试剂盒可用于快速的随机引物DNA标记。该方法能够标记仅微量的DNA，例如，从凝胶或融化琼脂糖中分离的DNA限制性片段。单独提供的核苷酸溶液为改性脱氧核糖核苷三磷酸酯(例如，³²P、³⁵S、³H、异羟基洋地黄毒苷元、荧光素、生物素或罗丹明)提供了一种选择。高引物DNA标记试剂盒已被用于：

• 高引物标记探针用于多种杂交技术：Southern 印迹
• Northern 印迹
• 基因文库筛选
• 原位杂交
• 消减杂交 (SSH) 试验

High Prime DNA 标记试剂盒提供与 High Prime 相同的特性。

包装

1 个试剂盒包含 6 种组分。

原理

Feinberg 和 Vogelstein 最初开发的“随机引物”DNA 标记方法是基于所有可能序列的寡核苷酸与待标记的变性 DNA 杂交。Input DNA 是合成标记 DNA 的唯一模板，使使用这种方法标记微量 DNA (10 ng) 成为可能。模板使用 Klenow 聚合酶在 3′ 端合成互补 DNA 链-用作引物的随机寡核苷酸的 OH 末端。修饰的脱氧核苷三磷酸(例如，用 ³² P、 ³⁵ S、 ³ H、地高辛、生物素、荧光素或罗丹明标记)加入到反应中很容易掺入到新合成的 DNA 链中。

制备说明

工作液： dATP，dGTP，dTTP 混合物：
一个标记反应移液器：
1μl dATP，(瓶 2)
1μl dGTP，(小瓶 4)
1μl dTTP，(瓶 5)
至反应瓶中。

注： 如果重复使用同类型标记的脱氧核苷三磷酸，为方便起见，我们建议制备其他三种脱氧核苷三磷酸等量的混合物。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

产品性质

用途	sufficient for 50 labeling reactions (0.01 to 2 μg DNA per assay)
质量水平	100
manufacturer/tradename	Roche
运输	dry ice
储存温度	−20℃

组份列表

组份不可单独销售

货号	组份
	High Prime Reaction Mixture (random primer mixture, Klenow polymerase, labeling grade, and 5x stabilized reaction buffer in 50% (v/v) glycerol) 5x concentrated
	dATP: 2′-Deoxyadenosine-5′-triphosphate in Tris buffer 0.5 mM
	dCTP: 2′-Deoxycytidine-5′-triphosphate in Tris buffer 0.5 mM
	dGTP: 2′-Deoxyguanosine-5′-triphosphate in Tris buffer 0.5 mM
	dTTP: 2′-Deoxy-thymidine-5′-triphosphate in Tris buffer 0.5 mM
	Control DNA: λDNA 12.5 μg/ml

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash