产品说明
一般描述
重组DNase I是一种DNA特异性内切酶。该酶可通过水解连接到DNA上的磷酸二酯而催化双链及单链DNA的随机降解,形成寡核苷酸和单核苷酸的混合物。重组DNase I的生产过程中所使用的所有材料都无动物来源,因而可形成无动物源产物。
内容物
- 重组DNasae I,不无RNase,10 U/μl
- 孵育缓冲液,10x浓度
特异性
热灭活:一单位无RNase重组DNase I可在75 ℃孵育10分钟进行热灭活。
重要提示:无RNase重组DNase I也可根据标准实验方案通过酚提取进行灭活并去除,如分子生物学中的现有实验方案。
应用
在对RNase较为敏感的应用中,可采用无RNase的重组DNase I降解DNA。例如,DNase I常用于:
- 在RT-PCR之前去除RNA中的基因组DNA
- 在体外转录反应之后分离不含DNA的RNA
- 进行缺口翻译
- 在真核DNA中定位DNase敏感的区域
特点和优势
- 可从任意RNA样品中去除DNA污染
- 未检测出RNase或蛋白酶活性
- 可热灭活,因而免去了有机提取的必要
- 通过优化的孵育缓冲液进行运输,以最大限度维持DNase活性
- 完全无动物来源过程生产,去除了动物来源材料相关的任何风险
包装
1个试剂盒包含2种组分
质量
杜绝污染:每批次都按照现有质检工艺检测以确保无RNase及蛋白酶。
产品规格
糖基化形式
重组DNase I异质性N端糖基化,因此会在电泳时呈现两条带。
二价离子要求
DNase I需要二价阳离子以实现最高活性。DNA特异性内切酶通过镁离子等离子激活,并由钙离子刺激。因此,酶会受到EDTA等金属螯合剂抑制。
单位定义
一单位指的在1ml的检测条件下可造成260 nm处吸光值提高0.001/min的酶活性。
反应条件:
根据以下检测混合物测定体积活性。将100 μg小牛胸腺DNA与40至70单位的无RNase重组DNase I在1x孵育缓冲液中+ 25℃下孵育。测定260nm处吸光度增量。
制备说明
激活剂:二价金属离子
工作溶液:储备溶液:20 mM Tris-HCl,50 mM NaCl,2 mM CaCl2,2 mM MgCl2,1mM二硫赤藓糖醇,0.1 mg/ml Pefabloc SC,50% 甘油(v/v),pH 7.6 (4 ℃)。
孵育缓冲液(10x):400 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,60 mM MgCl2, 10 mM CaCl2,pH 7.9。
酶稀释液:25 mM Tris-HCl,50%甘油(v/v),pH 7.6 (4 ℃)。
储存及稳定性
将未稀释的酶溶液-15至-25℃储存;缓冲液4℃储存。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
基本信息
酶学委员会(EC)编号 | 3.1.21.1 ( BRENDA | IUBMB ) |
产品性质
质量水平 | 100 |
生物来源 | bovine pancreas |
重组 | expressed in Pichia pastoris |
形式 | solution |
分子量 | ~39 kDa |
包装 | pkg of 10,000 U |
manufacturer/tradename | Roche |
最佳pH | 7.0-8.0 |
运输 | dry ice |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |