产品说明
一般描述
蛋白质亲和纯化中最常用的技术是在蛋白质的 N-端或 C-端(甚至在暴露的环上)构建 6-14 个组氨酸序列。这样的多聚组氨酸伸展与镍和钴等二价金属离子强烈结合。这种作用可用于分离蛋白质。使用螯合剂可以将金属离子固定在基质上，这样仍然允许离子干扰蛋白质的多聚组氨酸标记。当这些带 his 标签的蛋白质通过含有固定金属离子的色谱柱时，蛋白质通过该标签与色谱柱结合。几乎所有未标记的蛋白质都将通过色谱柱。通过与多聚组氨酸标记竞争结合色谱柱的咪唑洗脱，或通过降低 pH 值来降低标记对树脂的亲和力，蛋白质将从色谱柱中释放出来。虽然该程序通常用于纯化具有工程亲和标记的重组蛋白，但也可用于对二价阳离子具有固有亲和力的天然蛋白。
特点和优势
cOmplete His-Tag 纯化柱有2种规格，均预装cOmplete His-Tag纯化树脂。cOmplete His-Tag 纯化树脂是创新型大容量 IMAC 基质(固定化金属亲和色谱)，可方便地从总裂解物中一步纯化组氨酸标记蛋白。罗氏专有的镍螯合物化学成分可确保与常用还原剂(如DTT)、螯合金属蛋白酶抑制剂(如EDTA)以及各种缓冲物质和缓冲盐存在出色的相容性。广泛的相容成分选择允许优化缓冲液，实现蛋白最大的稳定性和溶解性。
cOmplete His-Tag 纯化柱能完全兼容 ÄKTA Systems (Cytiva).等标准纯化系统。
- 使用最适合您蛋白的缓冲液条件
- 重复获得高纯度蛋白
- 保护您的蛋白免受有毒镍污染
- 在安全和环保的环境中工作
包装
- 06781535001(5 mL 色谱柱；1 个色谱柱含有 5 mL cOmplete His-Tag 纯化树脂)
- 06781543001(5 x 1 mL 色谱柱；5 个色谱柱，含 1 mL cOmplete His-Tag 纯化树脂)
相容性
长期储存的相容性： 20% 乙醇，pH 4.0 至 pH 9.0
色谱过程中的相容性： 树脂在纯化(孵育 1 小时)，6M 盐酸胍、8M 尿素(pH 2.0 至 pH 14.0)过程中与 10 mM EDTA、10 mM DTT相容。
清洁过程中的相容性： 4%SDS 形成cOmplete His-Tag 纯化树脂填充柱，预先加入 Ni 2 + ，储存在 20% 乙醇中。
其他说明
推荐体积流速： 5 mL 色谱柱 (06 781 535 001)：2.5-10 mL/分钟
1 mL 色谱柱 (06 781 543 001)：0.5-2.0 mL/分钟
体积流速是色谱柱截面的函数。
推荐上样/清洗咪唑浓度： 无 His 标记的蛋白非特异性结合较低。
上样和/或清洗缓冲液中使用 高达 5 mM 咪唑。
如果用cOmplete His-tag 纯化柱建立新的 His-tag 蛋白纯化检测方法 ，不要使用咪唑 。例如，如果第一步后 His 标签蛋白的纯度需要提高，则第二步使用最终浓度高达 5 mM 的咪唑。
推荐洗脱用咪唑浓度： 高达 500 mM
请注意：
与其他可用的树脂相比，结合 His标记蛋白质通常从咪唑浓度较低的cOmplete His 标记纯化柱中洗脱，例如，25-45 mM。
结合量
树脂与各种类型蛋白的结合能力可因蛋白的大小等蛋白特性而不同。
cOmplete His-Tag 纯化柱与多组氨酸标记蛋白可高度特异性结合。因此，与传统金属螯合物基质相比，其结合动力学可能不同。通过降低层析纯化过程中的流速，蛋白有更多的时间与树脂结合，从而可实现cOmplete His标记纯化柱的全容量。
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
法律信息
cOmplete is a trademark of Roche
产品性质
| 包装 | pkg of 5 x 1 mL (columns (06781543001)) pkg of 5 mL (column (06781535001)) |
| manufacturer/tradename | Roche |
| 参数 | 1,420 cm/hr max. flow rate |
| 容量 | ≥40 mg/mL, resin binding capacity |
| 运输 | wet ice |
| 储存温度 | 2-8℃ |
安全信息
| 象形图 |    |
| 警示用语： | Warning |
| 危险声明 | H226 - H317 - H319 - H351 |
| 预防措施声明 | P201 - P210 - P261 - P280 - P303 + P361 + P353 - P370 + P378 |
| 危险分类 | Carc. 2 - Eye Irrit. 2 - Flam. Liq. 3 - Skin Sens. 1 |
| 储存分类代码 | 3 - Flammable liquids |
| WGK | WGK 1 |
| 闪点(F) | 93.2 °F |
| 闪点(C) | 34 ℃ |
