产品说明

一般描述

便捷式酶和和核苷酸混合物。
缺口转录利用DNA酶和DNA聚合酶组合切割DNA螺旋的一条链，然后在聚合酶检测或“校对”缺口位点时掺入标记的核苷酸。生物素-16-dUTP与dTTP的摩尔比经过调整，可确保新合成DNA中的每20 至25 个核苷酸被生物素修饰。DNA中的半抗原密度可在免疫学检测反应中产生最高的灵敏度。
该方法常使用大质粒、粘粒和PCR片段，DNA可以线性的或超螺旋的。各模板在标准90分钟反应中产生一致的结果，得到的平均探针长度为200个碱基对，最长达到500个碱基对。

特异性

热灭活：通过添加1 μl 0.5 M EDTA (pH 8.0)、加热至65 ℃并维持10分钟来终止反应。

应用

生成用于生物素-16-dUTP标记的 原位 杂交的高灵敏度探针。
注：该混合物也可用于过滤杂交技术，但是，对于高灵敏度过滤杂交探针，我们建议使用Roche Applied Science的Biotin-High Prime。
对于使用其他半抗原对 原位 探针进行非放射性标记，Roche Applied Science提供 DIG-缺口转录混合物或缺口转录混合物。

质量

已通过斑点杂交试验测试功能。

原理

缺口转录方法是基于DNase I能够在MgCl₂存在时，在低酶浓度条件下在DNA上随机产生缺口。大肠杆菌DNA聚合酶I利用缺口的3′-OH末端作为引物，以5′?3′方向合成与完整链互补的DNA。DNA聚合酶I的5′ → 3′核酸外切活性能同时去除合成方向上的核苷酸。聚合酶活性用同位素标记的或半抗原标记的脱氧核糖核苷三磷酸依次替换去除的核苷酸。在低温(+ 15℃)条件下，反应中未标记的DNA被新合成的标记DNA取代。

外形

1小瓶，含5倍浓缩溶液，50％甘油(v/v)稳定反应缓冲液以及DNA聚合酶I和DNase I，0.25mM dATP，0.25mM dCTP，0.25mM dGTP，0.17mM dTTP和0.08mM生物素-16-dUTP。

制备说明

测定时间：100分钟

样品材料
超螺旋和线性质粒DNA
超螺旋和线性粘粒DNA
纯化的PCR产物
注：缺口转录前，无需模板变性。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

产品性质

安全信息