产品说明

一般描述

用于生物素-16-UTP标记RNA的便捷核苷酸混合物。

特异性

热灭活：添加2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0)以终止反应。

应用

生物素RNA标记混合物已用于通过生物素-16-UTP与SP6、T7和T3 RNA聚合酶体外转录的RNA标记。
生物素标记RNA还应用于一系列杂交技术：

• DNA印迹
• RNA印迹
• 斑点印迹
• 菌落及菌斑清除
• RNA酶保护试验
• 原位杂交
• 微阵列杂交
• RNA pull down试验

特点和优势

组份
10x 浓缩液包含: ATP、CTP、GTP各10mM，6.5mM UTP，3.5mM生物素-16-UTP，pH 7.5

质量

结合DIG RNA标记试剂盒进行了功能检测。

原理

生物素标记的、确定长度的单链RNA探针通过体外转录产生。生物素-16-UTP通过SP6、T7和T3 RNA聚合酶以大约每20到25个核苷酸的间隔插入转录产物中，转录条件如下所述。生物素RNA标记混合物专为Roche SP6、T7和T3 RNA聚合酶设计，随附优化的转录缓冲液。

制备说明

试验时间：135分钟

样品材料

• 线性化质粒DNA：待转录的DNA将会被克隆至含有SP6，T7或T3 RNA聚合酶启动子并相邻于多接头的合适转录载体的多接头位点。对于′流失′转录本的合成，质粒是通过限制性酶进行线性化的。应使用限制性酶生成的5′-突出；应避免3′突出。线性化模板DNA应采用酚氯仿萃取和乙醇沉淀法纯化，以避免RNase污染。为′完成′转录，使用了环状质粒DNA
• PCR产物：含有RNA聚合酶启动子序列的PCR片段，也可以作为转录模板。推荐在转录前通过凝胶电泳纯化正确的PCR片段。
• 标记效率：μ通过1μg线性模板DNA和RNA聚合酶进行标准标记反应，产生大约10μg全长生物素标记RNA。在斑点试验中，联用抗生物素-AP与化学发光底物CSPD可检测低至0.3pg的生物素标记RNA。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

产品性质

安全信息