产品说明
一般描述
cDNA末端快速扩增(RACE)是一种用于从部分已知序列快速获得全长cDNA的常用技术。5′/3′ RACE试剂盒包含转录物逆转录酶和重组末端转移酶。转录子逆转录酶可转录全长cDNA,用于高达14 kb的55′或3′ cDNA片段的高灵敏度和快速扩增。其具有热稳定性(高达+ 65℃),适用于具有高二级结构的高GC含量模板。使用转录物逆转录酶可以实现高灵敏度,从而实现高效的cDNA合成和长RACE产物的获得。重组末端转移酶用于将同聚A尾添加至cDNA的3′末端。poly(A)+尾可降低oligo(dT)-锚定引物所产生的不适当截短的可能性,并且可以克服相较于G / C来说较弱的A / T杂交问题.此外,在oligo(dT)-锚定引物可以与内部位点进行杂交并且截短扩增产物之前,需要一段更长的A残基片段。使用基因特异性引物和oligo(dT)-锚定引物通过PCR扩增加尾cDNA。使用嵌套的特异性引物和PCR锚定引物,通过第二次PCR进一步扩增所获cDNA,从而将RACE产物克隆到合适的载体中以用于后续研究。
特异性
热灭活:终端转移酶:70℃,10分钟
转录物逆转录酶:85℃,5分钟
应用
第二代5′/3′ RACE试剂盒适用于
- RNA分子的结构和表达研究
- 生成全长cDNA
- 从低拷贝RNA信使中分离和鉴定5′或3′末端
- 第一链cDNA合成
- 扩增和进一步克隆稀有mRNA
- 与外显子捕获方法结合使用
- RACE反应产物无需克隆即可直接测序
特点和优势
- 强大的性能: 重组转录物逆转录酶能够在困难的二级RNA结构区域上向前移动。
- 方便:RNA的5′ 或3′ 末端的功能和表达研究可以用相同的试剂盒进行。
- 可靠: 使用重组末端转移酶获得的dA加尾cDNA降低了不当截短的概率。
- 可重复:具有非3′ dT的寡聚dT-锚定引物能够确保与poly (A)尾的内端正确结合。
- 产生长片段:使用转录物逆转录酶生成长达14kb的cDNA。
对照反应包括使用对照引物neo1/rev将对照RNA转录成第一链cDNA。使用对照引物neo2/rev和neo3/for进行cDNA的扩增,以获得157bp的PCR产物。使用dATP对纯化的cDNA进行加尾。用寡聚dT-锚定引物和对照引物neo2/rev进行加尾cDNA的扩增,以获得293bp的PCR产物。
包装
1个试剂盒包含12个组分
其他说明
仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。
产品性质
用途 | sufficient for 10 reactions |
质量水平 | 100 |
manufacturer/tradename | Roche |
运输 | dry ice |
储存温度 | −20℃ (−15℃ to −25℃) |
组份列表
组份不可单独销售
货号 | 组份 |
cDNA Synthesis Buffer 5x concentrated | |
Transcriptor Reverse Transcriptase 20 U/μl | |
Deoxynucleotide Mix | |
dATP, pH 7.5 (20 ℃) | |
Reaction Buffer 10x concentrated | |
Terminal Transferase, recombinant | |
Control neo-RNA 1 ng/μl | |
Oligo dT-Anchor Primer | |
PCR Anchor Primer | |
Control Primer neo1/rev primer 12.5 μM | |
Control Primer neo2/rev primer 12.5 μM | |
Control Primer neo3/for primer 12.5 μM |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |