产品说明
一般描述
PCR DIG探针合成试剂盒包含碱不稳定性洋地黄毒苷 (DIG)-11脱氧尿苷三磷酸(dUTP)制剂。该试剂盒可方便有效地制备聚合酶链式反应(PCR)所需的高灵敏度DIG标记DNA探针。这一探针可通过PCR方法利用DIG-11dUTP(碱不稳定性)标记。DIG-dUTP:dTTP的比例为1:2。
PCR DIG探针合成试剂盒包含增强高保真DNA聚合酶混合物。这种强大的酶混合物具有校对活性，以10 pg质粒DNA和10 ng基因组DNA为模板，可聚合40 bp至5 kb长的探针。DIG标记探针可稳定储存一年以上。
我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。 DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案，可替代核酸放射性标记和检测。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。
应用
利用PCR DIG探针合成试剂盒制备的洋地黄毒苷(DIG)标记DNA探针适于检测Southern和Northern杂交中的低(单)拷贝基因mRNA。DIG标记DNA探针也已用于原位杂交过程中的DNA标记。
可根据探针长度调节提供的dUTP-核苷酸混合物浓度。可在琼脂糖凝胶上快速确定标记效果。
可按照包装说明书中的方案，多次抗体剥离和重新检测。
一次PCR标记反应 (50 μl)制备的探针，通常足够用于20 ml杂交溶液。本试剂盒可进行约25次反应(50 μl)。
包装
1个试剂盒包含6种组分。
质量
每个批次的PCR DIG探针合成试剂盒都在PCR中经过功能呢检测。扩增产品在基因组Southern blot中进行了检测。
在如本包装内插页所描述的PCR条件下，对照反应可生成442bp的扩增产物。由于在PCR过程中DIG-dUTP的多次插入，PCR产物的分子量将会相对于未标记PCR产物略有提高。在将PCR产物杂交至10μg人类基因组DNA后可通过后续的化学发光检测检测到特异性的片段模式。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
样品材料
任何适合作为PCR模板的DNA都可被标记。可使用：
- 质粒DNA, 10至100pg (最佳量 10pg)
- 基因组DNA, 1至50ng (最佳量, 10ng)
PCR中模板浓度是生成特异性探针的最为重要因素。对于绝大多数模板，请勿使用超过上述的给定量。过多的模板将会导致初级延伸产物的共扩增(那些复制超过了结合位点的)。这些初级延伸产品可能会含有重复序列或来自二级结合位点(如果从基因组DNA制备)或载体序列(如果从质粒DNA制备)的不相关产物。在后续的杂交检测中，探针-靶标的杂合物将会因为探针会与载体或基因组DNA序列交叉杂交而形成拖尾。
为了获得更好的结果，可使用克隆的插入片段作为模板。基因组DNA可能会更难以使用。
模板的纯化对于PCR标记并没有其他类型标记那么重要。
一次反应可生成用于分析650cm2印迹膜的足够标记探针。
产品性质
| 用途 | sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume) |
| 质量水平 | 100 |
| manufacturer/tradename | Roche |
| 环保替代产品特性 | Designing Safer Chemicals Learn more about the Principles of Green Chemistry. |
| 环保替代产品分类 | Aligned |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
| 货号 | 组份 |
| Enzyme Mix, Expand High Fidelity 3.5 U/μl | |
| PCR DIG Probe Synthesis Mix, containing dATP, dCTP, dGTP (2 mM each) 10x concentrated | |
| PCR Buffer with MgCl2 10x concentrated | |
| dNTP Stock Solution, containing dATP, dCTP, dGTP, dTTP (2 mM each), pH 7.0 10x concentrated | |
| Control Template, plasmid DNA in Tris/EDTA buffer, pH 8.0. The 5-kb plasmid contains the cDNA for the human tissue-type plasminogen activator (tPA) 20 pg/μl | |
| Control PCR Primer Mix, containing 50 pmol of each primer, control PCR primer 1 and 2 2 mM each |
安全信息
| 危险声明 | H412 |
| 预防措施声明 | P273 - P501 |
| 危险分类 | Aquatic Chronic 3 |
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 2 |
| 闪点(F) | does not flash |
| 闪点(C) | does not flash |
