产品说明

一般描述

用于大规模(maxi)制备质粒DNA。

应用

Genopure质粒大提试剂盒可用于从细菌培养物中大量制备转染级质粒DNA(最多500μg质粒)。分离得到的质粒适用于大多数分子生物学应用：

• 转染
• Southern印迹
• 测序
• PCR/长片段PCR
• 限制性酶切消化
• 克隆

特点和优势

Genopure质粒大提试剂盒使用改良的碱性裂解法，可大量制备高纯度的质粒DNA。

• 使用即用型试剂，节省时间。

最多可纯化10个样品(10分钟手动操作/总共75分钟)。

• 可纯化所有大小和类型的质粒

甚至是BAC DNA，因为可以过滤粗裂解物以避免质粒剪切。

• 可并行处理多个样本

使用高速重力流动柱。

• 无需使用有害的有机化合物

如氯化铯、苯酚、氯仿和溴化乙锭。

• 所得质粒DNA的纯度高于

通过2×氯化铯梯度离心制备的质粒。

组分

• 悬浮缓冲液
• RNase A
• 裂解缓冲液
• 中和缓冲液
• 平衡缓冲液
• 洗涤缓冲液
• 洗脱缓冲液
• NucleoBond AX 500色谱柱
• 折叠式过滤器(直径240 mm)
• 密封圈

质量

已对使用该试剂盒纯化得到的质粒DNA进行了限制性酶切消化测试；根据实验方案所述方法从转化HB101中分离得到pUC 19。如琼脂糖凝胶分析所示，在+ 37℃下使用1单位Msp I将1μg质粒完全酶解2小时。

用250μg纯化质粒测试质粒回收率。超螺旋形式大于80%时，回收率高于90％。通过从DH5a细胞中分离pBS，确定质粒DNA的产量。从A600密度为3-6的150ml培养物中，获得超过400μg的质粒DNA。

纯度(利用A₂₆₀/A₂₈₀比率进行检测)为1.8±0.2。

利用通过标准方法纯化并通过琼脂糖凝胶电泳检测的3 μg pBS分析RNA污染。结果未检测到RNA。

已经根据当前的质量控制流程，检测发现试剂盒组分不含核酸酶。

制备说明

分离流程基于改良的碱性裂解法，可分为以下步骤：细菌被部分裂解，使质粒DNA透过细胞壁进入上清液。较大的大肠杆菌染色体DNA被困在细胞壁中。通过过滤或离心，除去裂解物中的细胞碎片，并将含有质粒DNA的组分上样到预平衡柱上。由于净化的裂解物溶于低盐缓冲液后再上样到柱上，使得质粒DNA与柱中的大孔阴离子交换材料结合。用高盐洗涤液从柱上洗脱细胞杂质。 最后，从柱上洗脱质粒DNA。将回收的DNA从洗脱液中沉淀出来，以除去盐并浓缩质粒。

分析说明

样品：
含有高拷贝数质粒的大肠杆菌培养物：30至150mL细菌培养物
含有低拷贝数质粒的大肠杆菌培养物：100至500mL细菌培养物
质粒大小：分离流程适用于所有大小的质粒。注意：较大构建体(高达100 kb)的裂解液应通过过滤而不是离心来净化，以避免剪切质粒。
所需时间：75分钟(包括过滤裂解液)
一般产量：
高拷贝数质粒：3至5 μg/mL培养物
低拷贝数质粒：0.2至1 μg/mL培养物
产物纯度：分离的质粒DNA不含其他细菌成分，包括RNA。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
离子交换色谱

产品性质

质量水平	100
manufacturer/tradename	Roche
包装	kit of for 10 isolations from 30 to 150 ml

安全信息

象形图
警示用语：	Danger
危险声明	H226 - H290 - H314
预防措施声明	P210 - P280 - P303 + P361 + P353 - P304 + P340 + P310 - P305 + P351 + P338 + P310 - P370 + P378
危险分类	Eye Dam. 1 - Flam. Liq. 3 - Met. Corr. 1 - Skin Corr. 1
储存分类代码	3 - Flammable liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	100.4 °F
闪点(C)	38 ℃