产品说明
一般描述
经过改良的第二代 KAPA2G Robust DNA 聚合酶可以解决广泛扩增子类型(富含 GC 和AT)的不一致扩增问题。该产品具有更高的持续合成能力和比活性，可转化为强大的 PCR 性能、高灵敏度和对常见抑制剂的耐受性。KAPA2G Robust DNA 聚合酶的高性能适合于挑战性 PCR 应用和困难样本扩增，显著降低使用多种酶和扩增方案的优化难度。
应用
KAPA2G Robust PCR 试剂盒适用于：
- 扩增富含 GC 或 AT 的模板
- 含有常见 PCR 抑制剂(例如，盐、尿素、SDS 或乙醇)的模板
- 粗制样本 PCR，例如口腔拭子，培养的哺乳动物、酵母或细菌细胞
- 菌落 PCR
- 聚合酶链式反应聚合酶
生化/生理作用
KAPA2G Robust DNA 聚合酶具有 5′→3′ 聚合酶和 5′→3′ 核酸外切酶活性，但是没有3′→5′ 核酸外切酶(校正)活性。KAPA2G Robust具有类似于野生型 Taq的保真度；它的错误率为大约每结合1.7 x 105个核苷酸出现1次错误。KAPA2G Robust是一种高度持续性DNA聚合酶，能够以15秒/周期的延伸时间扩增高达1 kb的DNA片段。使用额外的延伸时间可能导致拖尾(smearing)和非特异性扩增。对于以基因组DNA为模板的1 kb<扩增子，每个周期15秒足以获得高产量的产物。对于较长的扩增子，时间可以增加到最大60秒/ kb，以15秒为增量。KAPA2G Robust生成的PCR产物是3′-dA尾的，可以克隆到TA克隆载体中。
特点和优势
有效扩增富含 GC 和 AT 的靶标
- 强力扩增富含 GC 和 AT 的模板
- 提高 PCR 成功率
改善对常见 PCR 抑制剂的耐受性
- 从粗样本中有效扩增
- 每单位酶的产率和灵敏度更高
在菌落 PCR 中具有无与伦比的性能
- 在大肠杆菌和酵母细胞直接 PCR 中具有更高的产量和更好的一致性
快速注释：
- 带 dNTP 的 KAPA2G Robust PCR 试剂盒包含 KAPA2G Robust DNA 聚合酶，设计用于高处理能力和抑制剂耐受性。
- 纯化的基因组 DNA 和粗制样品(例如菌落 PCR)均可用作模板。
- 每 25 μL 反应使用 0.5 UKAPA2G 耐用 DNA 聚合酶。更具挑战性的 PCR(GCrich，粗品)可能需要更高的酶浓度。
- 每个循环的延伸时间设置为 15 sec/kb，对于困难扩增子或模板，增加到 30-60 sec/kb。
- 含有1.5mM MgCl2 的 KAPA2G 缓冲液(1X)。
- 可以使用试剂盒中提供的 25mM MgCl2 溶液额外添加 MgCl2。
- KAPA2G 缓冲液 A 经过优化，具有高产量、特异性和灵敏度。
- 对于抑制剂污染的模板样品，建议使用 KAPA2G 缓冲液 B。
- KAPA2G GC 缓冲液推荐用于富含 GC 的 PCR(>70% GC)。
- KAPA 增强剂 1 可与 KAPA2G 缓冲液 A 或 B 一起使用，特别适用于富含 GC 的 PCR 试验。
- 反应产物是 3′-dA-尾，并且可以克隆到 TA 克隆载体中。
质量
每批 KAPA2G 耐用 DNA 聚合酶经确认含 < 2% 污染蛋白 (Agilent protein 230 Assay)。 KAPA2G 耐用 PCR 试剂盒经过严格的质量控制测试，没有污染外源和内切酶活性，符合 DNA 污染水平的严格要求。
制备说明
在每次使用前，应确保产品已完全解冻并充分混合。短期使用时，可将试剂保存 4℃ 条件下(最长 1 个月)。长期储存时，应将试剂放回 -20℃ 环境中。如果所有组份在使用过程中非常仔细，没有受到污染，则试剂盒在短时间内(最多 3 天)被放置在室温下(无意中)预计不会失效。不建议在室温和 4℃ 下长期储存。请注意，在 -20℃ 以上的温度下储存的试剂在使用过程中受到污染时更容易降解，因此在超过 -20℃ 的温度下储存的风险由用户自己承担。
其他说明
仅供研究使用。不可用于诊断过程。
基本信息
| NACRES | NA.55 |
产品性质
| 质量水平 | 100 |
| 用途 | sufficient for 200 reactions sufficient for 500 reactions |
| 保质期 | ≤12 mo. |
| 特点 | Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR dNTPs included hotstart: no |
| 包装 | pkg of 100 U (KK5004) pkg of 250 U (KK5005) |
| manufacturer/tradename | Roche |
| technique(s) | PCR: suitable |
| input | crude DNA |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
| 货号 | 组份 |
| KAPA2G Robust Standard or HotStart® DNA Polymerase 5 U/µL | |
| 5X KAPA2G Buffer A with MgCl2 | |
| 5X KAPA2G Buffer B with MgCl2 | |
| 5X KAPA2G GC Buffer with MgCl2 | |
| 5X KAPA Enhancer 1 | |
| MgCl2 25 mM | |
| dNTP Mix (optional) 10 mM each |
安全信息
| 象形图 |   |
| 警示用语： | Warning |
| 危险声明 | H302 - H371 - H412 |
| 预防措施声明 | P260 - P264 - P270 - P273 - P308 + P311 - P501 |
| 危险分类 | Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - STOT SE 2 |
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 1 |
| 闪点(F) | does not flash |
| 闪点(C) | does not flash |
