产品说明

一般描述

共表达GFP的Cas9-D10A切口酶表粒使用CMV启动子，可获得较强的Cas9-D10A 瞬时表达。您可以使用MluI和NheI酶切将CMV替换为其它启动子。同时，使用XbaI酶切可使Cas9D10A表达质粒线性化，得到基于T7的mRNA产物。

应用

功能基因组
使用配对Cas9 切口酶+GFP 用于：

• 在多种细胞系中进行基因敲除
• 对不适合于RNAi的基因进行完全敲除
• 建立基因敲入细胞系，将启动子、融合标签或报告基因整合到内源性基因中

CMV-CAS9D10A-2A-GFP Plasmid has been used in CRISPR-Cas9 mutagenesis to truncate the forkhead box O3 (FOXO3) gene in the mammalian cell.

组分

每管包含1μg的 Cas9-D10A 切口酶-GFP质粒。
请注意，该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR配对切口酶产品选项卡单独购买。

外形

1μg Sigma Cas9-D10A 切口酶-GFP 质粒

其他说明

来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统经过包含两种分子元件，即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA)，该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9核酸内切酶可在单个gRNA的引导下，在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似，细胞随后会激活内源性DNA修复程序，即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR)，对目标DSB进行修复。GFP通过2A肽段连接，与Cas9切口酶蛋白的相同mRNA共表达，实现了对转染效率的追踪，也能通过荧光激活细胞分选术(FACS)对基因组编辑活性进行富集。

法律信息

CRISPR专利正在申请中

基本信息

NACRES

NA.51

产品性质

质量水平	200
重组	expressed in E. coli
包装	vial of 50 μL
浓度	20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)
启动子	Promoter name: CMV
报告基因	GFP
selection	kanamycin
运输	dry ice
储存温度	−20℃

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	nwg
闪点(F)	Not applicable
闪点(C)	Not applicable