产品说明
一般描述
Cas9表达质粒使用CMV启动子,以实现Cas9的强瞬时表达。可以使用MluI和NheI替换CMV来进行启动子替换。此外,Cas9表达质粒可以使用XbaI进行线性化,从而用于基于T7的mRNA生成。添加与Cas9核酸酶平移共表达的荧光团可以容易地实现成功转染的可视化。
应用
CMV-CAS9-2A-GFP 质粒已被用于诱导人类U937白血病细胞中的额外性梳样1( sex combs-like1 )突变。它也已用于CRISPR/Cas9分析。
CMV-CAS9-2A-GFP质粒适用于以下功能基因组学/靶点验证:
- 在多种细胞系中创建基因敲除
- 完全敲除不适合RNAi的基因
- 通过整合到内源基因中的启动子、融合标签或报告基因创造基因敲入细胞系
组分
1管含1μg 的Cas9-2A-GFP质粒。
请注意,该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。
原理
CRISPR/Cas被细菌和古细菌用作防御入侵病毒和质粒的防御系统。最近,来源于化脓性链球菌 的II型CRISPR/Cas系统已被设计为在真核系统中起作用,其使用两种分子组分:单一Cas9蛋白和非编码向导RNA(gRNA)。可以通过单个gRNA对Cas9内切核酸酶进行编程,从而将DNA双链断裂(DSB)导向所需的基因组位置。与由锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB类似,细胞随后激活内源DNA修复过程[非同源末端连接(NHEJ)或同源定向修复(HDR)],以愈合目标DSB。
其他说明
为了介导DNA双链断裂,必须与U6-gRNA质粒一起使用。
文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染)。
法律信息
CRISPR使用许可协议
基本信息
NACRES | NA.51 |
产品性质
质量水平 | 200 |
重组 | expressed in E. coli |
包装 | vial of 50 μL |
浓度 | 20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA) |
启动子 | Promoter name: CMV |
报告基因 | GFP |
selection | kanamycin |
运输 | dry ice |
储存温度 | −20℃ |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | nwg |
闪点(F) | Not applicable |
闪点(C) | Not applicable |