产品说明
一般描述
由布罗德研究所(Broad Institute)Feng Zhang实验室开发的人类GeCKO v2(双载体系统)文库,包含100,000多个独特的gRNA,用于人类基因组的基因敲除。利用lenti CRISPR双载体的混合文库将只会表达gRNA(利用lentiGuide-Puro载体),与版本1相比,该系统可产生100倍以上的高滴度病毒。lentiGuide-Puro库仅能用于已整合了Cas9的细胞(单独使用enti-Cas9-Blast载体进行生成)。Sigma的向导RNA型慢病毒人类GeCKO库分装为8管,每管25 ul,最低滴度为5X10^8 TU/ml(由p24试验检测)。每个物种特异性的文库被作为2个1/2文库(A和B)进行交付。建议同时对A和B文库进行筛选,从而使每个基因对应6个sgRNA(每个文库提供3个sgRNA)。两个文库均含有1000个非靶标对照sgRNA。A文库也会靶向miRNA(每个miRNA对应4个sgRNA)。
应用
功能基因组学/筛选/靶标验证
特点和优势
- 使用CRISPR核酸酶敲除蛋白质编码基因,从而可对蛋白质功能进行评估
- 可在实验室中实现对人类全基因组(16,000多个基因)的有效筛选,无需机器人或特殊设备
- 大量内在的富集和缺失克隆,使研究人员对实现混合筛选实验结果更自信
- 慢病毒CRISPR可感染多种不同的哺乳细胞,它通过将单导向RNA转导至表达Cas9的人类细胞中,促进筛选应用中的基因敲除。
- 将人类GeCKO版本2文库的双载体系统用于已将Cas9整合到基因组中的人类细胞。
- 转导后,使用嘌呤霉素gRNA筛选。
制备说明
每mL的Puro Kill Curve和Determining CFU(克隆形成单位)。在进行文库规模的筛选前,必须进行2次预实验。请访问Sigma.com/pooledscreening。
其他说明
该产品仅供研发使用,不可用作药物、家庭使用或其他用途。请查阅物质安全资料表,获取危险和安全操作规范信息。尽管生产的慢病毒转导颗粒是不可复制的,但仍然建议将其作为生物危害等级2级(RGL−2)生物体在实验室中进行处理。请遵循所有已发表的RGL-2指南,进行实验室废物处理和净化。
法律信息
CRISPR使用许可协议
慢病毒许可协议
基本信息
NACRES | NA.51 |
产品性质
质量水平 | 200 |
包装 | pkg of 8x25 μL (vials) |
浓度 | 5x108 VP/ml (via p24 assay) |
application(s) | CRISPR |
运输 | dry ice |
储存温度 | −70℃ |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 3 |
闪点(F) | Not applicable |
闪点(C) | Not applicable |