产品介绍：
基本信息
| 分子式 | C20H17N5O4 |
| 分子量 | 391.38 |
| 存储条件 | Freezer -20℃ |
应用
ANNA是一个理想的比率型pH敏感探针，它的吸收和发射光谱在生理pH范围内（pH 6-8）随pH的改变发生可逆的变化（如图1），并且在酸性和碱性状态下都有很高的荧光量子产率，其pH响应不受偶联基团或材料影响（如图2）[1-2]。ANNA应用广泛，已成功用于固定细胞在不同pH环境中成像（如图3）；活细胞内pH和肿瘤微环境体内外pH的监测。
图2 ANNA探针的pH响应性不受偶联基团或材料影响
图3 ANNA成功用于固定细胞在不同pH环境中成像
特点和优势：
- 在生理pH范围内具有良好的响应；
- 高光稳定性和高荧光量子产率；
- 离子强度对荧光团不产生干扰, 可用于活细胞、组织和动物等复杂生物体系；
- 可方便地通过活性酯法偶联其他基团，且pH响应功能不受影响。
产品使用说明
- 细胞置于直径为20mm的玻璃基底细胞培养皿（MatTek Co.）中培养24h；
- pH探针ANNA（4 M）与细胞在细胞培养基中孵育1-2h；
- 用PBS缓冲液（pH=7.4）清洗细胞3次，去除游离的探针；
- 细胞成像：用100倍共聚焦显微镜观察。激发波长是405nm和488nm，荧光信号收集1通道425-475 nm和2通道500-600 nm的荧光强度[注1];
- 制作pH标准曲线：用1mL含5 ug/mL nigericin[注2]的不同pH的高钾离子HEPES缓冲液[注3]处理细胞10min；进行细胞成像，根据I2通道/I1通道与pH的关系绘制曲线；
- 将待测样品比值带入标准曲线，获得实际细胞内外的pH。
1：如配有455nm激光器：可直接用455nm激发，收集1通道（470nm-500nm）和2通道（505nm-540nm）荧光强度。
2：一种运载钾离子和氢离子的载体，能够使细胞内外的pH快速地达到一致。
3：高钾离子HEPES缓冲液含有125 mM KCl, 20 mM NaCl, 0.5 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 5 mM 葡萄糖和20 mM HEPES。
参考文献
- Xiangjun Liu, Linlin Wang, Tao Bing, Nan Zhang, Dihua Shangguan. ACS Appl. Bio Mater., 2019, 2, 1368–1375.
- Yi Hou, Jin Zhou, Zhenyu Gao, Xiaoyu Sun, Chunyan Liu, Dihua Shangguan, Wensheng Yang, Mingyuan Gao. ACS nano, 9, 3199-3205 (2015).
其他说明
刘祥军副研究员科研成果 | pH敏感比率型荧光探针ANNA—生理pH范围内高效响应更多荧光染料和探针
荧光染料选择指南
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刘祥军副研究员科研成果 | 荧光探针HQO—准确示踪线粒体自噬
